[发明专利]一种毛囊干细胞的移植方法有效
申请号: | 201910700826.1 | 申请日: | 2019-07-31 |
公开(公告)号: | CN110484490A | 公开(公告)日: | 2019-11-22 |
发明(设计)人: | 陈相波;雷鸣;田朋飞;应荣 | 申请(专利权)人: | 杭州荣泽生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/074 | 分类号: | C12N5/074;A61L27/38;A61L27/50 |
代理公司: | 31253 上海精晟知识产权代理有限公司 | 代理人: | 刘增玉<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
地址: | 311215 浙江省杭州*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 毛囊干细胞 干细胞培养基 移植 干细胞 清洗 中性蛋白酶 毛囊生长 人体头皮 头皮组织 营养物质 无菌室 拔出 扩增 毛囊 制备 成活率 配方 消化 | ||
1.一种毛囊干细胞的移植方法,其特征在于:所述一种毛囊干细胞的移植方法包括以下步骤:
(1)首先在无菌室中取人体头皮组织,随后将头皮组织中加入中性蛋白酶进行消化清洗,清洗后按照毛囊生长方向拔出完整的毛囊;
(2)制备第一干细胞培养基,所述第一干细胞培养基添加的营养成分包括谷氨酰胺、氢离子缓冲剂、氢化可的松、牛胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、青霉素、链霉素和生理盐水,所述第一干细胞培养基添加的营养成分的重量份数为谷氨酰胺1.8-2.2mmol/L,氢离子缓冲剂1.9-2.1mmol/L,氢化可的松9-11ng/mL,牛胰岛素9.5-10.5ug/mL,转铁蛋白9-10.5ug/mL,亚硒酸钠9-11ng/mL,青霉素98-102U/mL,链霉素95-105ug/mL;
(3)将步骤(1)得到的完整毛囊放入步骤(2)得到的第一干细胞培养基中进行培养,所述第一干细胞培养基培养温度为36-38℃;
(4)制备第二干细胞培养基,所述第二干细胞培养基添加的营养成分包括血清替代物、维生素C、干细胞生长因子、谷氨酰胺、血小板源生长因子和生理盐水,所述第二干细胞培养基添加的营养成分的重量份数为血清替代物9-12ug/mL、维生素C40-60ug/mL、干细胞生长因子6-8ng/mL、谷氨酰胺3-5mmol/mL、血小板源生长因子11-13ng/mL,
(5)将步骤(3)培养的完整毛囊干细胞汇合度长至50-60%时将其转移至第二干细胞培养基中,在培养过程中第一干细胞培养基每24-36h更换一次;
(6)将步骤(5)在第二干细胞培养基培养的完整毛囊干细胞汇合度长至80-90%时进行传代,在培养过程中第二干细胞培养基每36-48h更换一次,所述第二培养基培养温度为36-38℃;
(7)根据待移植的位置,将步骤(3)培养完成的毛囊干细胞注射至待移植的部位,在注射过程中采用分散注射的方式进行注射,每次注射点应在120-160个,注射过程中每间隔20-30天注射一次。
2.根据权利要求1所述的一种毛囊干细胞的移植方法,其特征在于:所述毛囊干细胞移植过程中所有步骤均在无菌环境中进行。
3.根据权利要求1所述的一种毛囊干细胞的移植方法,其特征在于:所述第一干细胞培养基添加的营养成分的重量份数为谷氨酰胺2mmol/L,氢离子缓冲剂2mmol/L,氢化可的松10ng/mL,牛胰岛素10ug/mL,转铁蛋白9ug/mL,亚硒酸钠11ng/mL,青霉素102U/mL,链霉素100ug/mL。
4.根据权利要求1所述的一种毛囊干细胞的移植方法,其特征在于:所述第二干细胞培养基添加的营养成分的重量份数为血清替代物9ug/mL、维生素C60ug/mL、干细胞生长因子6ng/mL、谷氨酰胺5mmol/mL、血小板源生长因子11ng/mL。
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