[发明专利]一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其非疾病诊断目的的检测方法

权利要求书

1.一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒，其特征在于，包括：NHS磁珠悬浮液、抗缪勒氏管激素单抗I、抗缪勒氏管激素单抗II、偶联缓冲液、封闭液、增强液、清洗液、校准品；所述增强液的制备方法为6mL 0.1mol/L邻苯二甲酸氢钾用冰醋酸调pH为3.2，再依次加入15μmol的已纯化β-NTA，50μmol的TOPO，1mL的Triton X-100，最后加超纯水定容至1L，搅拌均匀，4℃暗保存待用；所述β-NTA的纯化方法：将β-NTA置于圆底烧瓶中，加入70％乙醇溶解，于70℃恒温水浴放置20min；趁热抽滤，除去不溶的杂质；将滤液冷却，使结晶析出，用无水乙醇清洗结晶多次，最后将结晶干燥，即得纯化的β-NTA。

2.根据权利要求1所述的一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的非疾病诊断目的的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取抗缪勒氏管激素单抗I用偶联缓冲液稀释至浓度≥20ug/mL；

(2)取100μL的NHS磁珠悬浮液于反应管中，磁性分离，保留NHS磁珠，弃上清液；加入500μL的偶联缓冲液于反应管中，涡旋15s；磁性分离，保留NHS磁珠，弃上清液；

(3)取1mL已稀释的抗缪勒氏管激素单抗I加入到反应管中，涡旋30s，混匀NHS磁珠；将反应管置于旋转混合仪上，室温孵育2h；

(4)孵育结束后，磁性分离，弃上清液，保留NHS磁珠；加入1mL的封闭液于反应管中，涡旋20s，将反应管置于旋转混合仪上，室温孵育1h，磁性分离，弃上清液，保留NHS磁珠；最后加入1mL的清洗液于反应管中，涡旋20s，磁性分离，弃上清液，保留NHS磁珠；重复上述清洗步骤1次；得到偶联抗缪勒氏管激素单抗I的磁珠，加入保存液后，4℃保存待用；

(5)取500μL抗缪勒氏管激素单抗II、200μL的Eu³⁺-DTPA加入到反应管中，25℃磁力搅拌反应24h，得到Eu³⁺标记的抗缪勒氏管激素单抗II，将Eu³⁺标记的抗缪勒氏管激素单抗II用蛋白柱纯化后保存待用；

(6)在96孔微孔板中，依次加入偶联抗缪勒氏管激素单抗I的磁珠、50μL校准品或待测血清、150μL Tris-HCL反应缓冲液，25℃振荡孵育5min，静置2min，保留偶联抗缪勒氏管激素单抗I的磁珠，弃上清；用清洗液重复上述清洗步骤5次；再加入200μL的Eu³⁺标记的抗缪勒氏管激素单抗II，25℃振荡孵育5min；用清洗液重复上述清洗步骤5次；加入200μL增强液，25℃振荡孵育5min；采用时间分辨荧光免疫分析仪进行检测。

3.根据权利要求2所述的一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的非疾病诊断目的的检测方法，其特征在于，所述偶联缓冲液为浓度0.2M、pH 8.3的碳酸钠缓冲液。

4.根据权利要求2所述的一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的非疾病诊断目的的检测方法，其特征在于，所述清洗液为含有8mmol/L Nacl、0.1％BSA、0.2％牛血清白蛋白、0.1mol/L的Tween-80、0.1％NaN₃的Tris-HCL缓冲液。

5.根据权利要求2所述的一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的非疾病诊断目的的检测方法，其特征在于，所述封闭液为含1％BSA的PBS缓冲液。

6.根据权利要求2所述的一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的非疾病诊断目的的检测方法，其特征在于，所述保存液为含5％BSA，10％海藻糖，0.1％Tween-20的Tris-HCl缓冲液。