[发明专利]一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其非疾病诊断目的的检测方法

说明书

本发明公开了一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其非疾病诊断目的的检测方法，试剂盒包括NHS磁珠悬浮液、抗缪勒氏管激素单抗I、抗缪勒氏管激素单抗II、偶联缓冲液、封闭液、增强液、清洗液、校准品；本发明将时间分辨荧光免疫分析法的灵敏性、磁分离技术的快速性相结合，检测方法操作简便，检测时间大大缩短，重复性良好，可大面积用于临床检测。

技术领域

本发明涉及体外诊断领域，具体涉及一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其非疾病诊断目的的检测方法。

背景技术

抗缪勒氏管激素又称AMH，是早期卵泡的直接产物，由二硫化物桥连接两个72KDa单体组成的糖蛋白二聚体，由女性卵巢组织的粒层细胞分泌。AMH最初表达于初级卵泡的颗粒细胞层，在直径约0.1～0.2mm的窦前卵泡及直径约2mm左右小窦状卵泡中表达最强，而在＞4mm窦状卵泡中表达逐渐减弱至完全消失，对于卵泡发育具有重要的调节作用，血清AMH水平不受垂体促性腺激素的影响，在整个月经周期中数值变化不大。

相对于目前常用的预测卵巢储备及卵巢反应性(年龄及窦卵泡数目，卵泡刺激素和雌二醇等)传统方法而言，血AMH值可即时生成，可准确、灵敏地反映卵巢储备功能。在监测卵巢储备力、诊断卵巢相关疾病、预测IVF成功率及预防OHSS并发症等方面具有其他指标不可比拟的优势。AMH是目前预测卵巢反应、评估卵巢储备功能的最理想生物标志物。

对于AMH的检测，目前临床的方法包括：酶联免疫法、化学发光、电化学发光法等方法。目前最常用的是酶联免疫法利用酶联免疫法检测抗缪勒氏管激素含量，灵敏度高，特异性强，但检测时间长，不能自动化；化学发光法检测血清中AMH，能自动化检测，但需要昂贵化学发光检测系统。传统时间分辨荧光免疫分析法中，抗体与微孔板上捕获物质结合较慢，而免疫磁珠均匀分散于溶液中，与抗体接触面积增大，从而增加了免疫磁珠与抗体的结合速率，大大提高了检测反应的比表面积，缩短了检测时间，本发明检测抗缪勒氏管激素的试剂盒将时间分辨荧光免疫层析技术与磁分离技术相结合，具有灵敏度高，操作快速简便的优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其非疾病诊断目的的检测方法，具有特异性强、检测时间短、操作快速简便，短时间即可得结果等优点。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒，包括NHS磁珠悬浮液、抗缪勒氏管激素单抗I、抗缪勒氏管激素单抗II、偶联缓冲液、封闭液、增强液、清洗液、校准品。

一种非疾病诊断目的的定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的检测方法，包括如下步骤：

(1)取抗缪勒氏管激素单抗I用偶联缓冲液稀释至浓度≥20ug/mL；

(2)取100μL的NHS磁珠悬浮液于反应管中，磁性分离，保留NHS磁珠，弃上清液；加入500μL的偶联缓冲液于反应管中，涡旋15s；磁性分离，保留NHS磁珠，弃上清液；

(3)取1mL已稀释的抗缪勒氏管激素单抗I加入到反应管中，涡旋30s，混匀NHS磁珠；将反应管置于旋转混合仪上，室温孵育2h；

(4)孵育结束后，磁性分离，弃上清液，保留NHS磁珠；加入1mL的封闭液于反应管中，涡旋20s，将反应管置于旋转混合仪上，室温孵育1h，磁性分离，弃上清液，保留NHS磁珠；最后加入1mL的清洗液于反应管中，涡旋20s，磁性分离，弃上清液，保留NHS磁珠；重复上述清洗步骤1次；得到偶联抗缪勒氏管激素单抗I的磁珠，加入保存液后，4°保存待用；

(5)取500μL抗缪勒氏管激素单抗II、200μL的Eu³⁺-DTPA加入到反应管中，25℃磁力搅拌反应24h，得到Eu³⁺标记的抗缪勒氏管激素单抗II，将Eu³⁺标记的抗缪勒氏管激素单抗II用蛋白柱纯化后保存待用；