[发明专利]一种测定骨钙素含量的试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种测定骨钙素含量的试剂盒及其检测方法，包括磁微粒偶联N‑MID捕获抗体，酶标记N‑MID检测抗体，N‑MID校准品，酶作用的化学发光底物，清洗液；目前国内大多采用酶联免疫法和放射免疫法测定全段骨钙素，由于全段骨钙素自身稳定性差，标本存放温度和时间会影响实验结果，N‑中端骨钙素(N‑MID)不易被蛋白酶水解，血清中含量稳定，本发明试剂盒对血清中的N‑MID进行检测，检测结果可靠。

技术领域

本发明涉及体外诊断领域，具体涉及一种测定骨钙素含量的试剂盒及其检测方法。

背景技术

骨钙素也称γ羧基谷氨酸蛋白或依赖维生素K蛋白，是骨基质中最重要的一种特异性非胶原蛋白，由骨和牙齿中的成骨细胞合成并分泌，其与骨钙的结合作用依赖于维生素K。骨钙素分子含49个氨基酸，分子量约为5800D。在骨合成中，成骨细胞产生骨钙素，此过程依赖于维生素K，同时维生素D3有促进产生骨钙素的作用。使用维生素K拮抗剂，可使此蛋白在骨中的含量减少，但并不影响其脯氨酸的含量，也不影响骨的机械强度。骨钙素产生后一部分进入骨基质，另一部分释放进入外周血。其降解产物骨钙素N端中分子片段(N-MID)因其良好的稳定性和重复性，可代替骨钙素反应骨形成的状态。骨钙素的主要生理功能是维持骨的正常矿化速率，抑制异常的羟基磷灰石结晶的形成，抑制软骨矿化速率。

通过血清骨钙素可以了解成骨细胞，特别是新形成的成骨细胞的活动状态。骨钙素值随年龄的变化以及骨更新率的变化而不同。骨更新率越快，骨钙素值越高，反之降低。在原发性骨质疏松中，绝经后骨质疏松症是高转换型的，所以骨钙素明显升高；老年性骨质疏松症是低转换型的，因而骨钙素升高不明显。故可根据骨钙素的变化情况鉴别骨质疏松是高转换型的还是低转换型的，对临床研究骨疾病和内分泌代谢性骨病的发病机理﹑研究骨质成分具有重要意义。

当前诊断骨质疏松主要通过双能X线设备测量骨密度或是酶联免疫法，但双能X线设备测量骨密度对于骨折风险预测、骨质疏松症的治疗效果评判却欠缺足够的敏感性和及时性，存在一定局限；市场上有酶联免疫吸附法为原理的定量检测试剂盒，但因骨钙素在血液中的不稳定性，使其检测的意义大打折扣。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定骨钙素含量的试剂盒及其检测方法，具有灵敏度高、操作快速简便等优点。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种测定骨钙素含量的试剂盒，包括磁微粒偶联N-MID捕获抗体，酶标记N-MID检测抗体，N-MID校准品，酶作用的化学发光底物，清洗液。

优选的，所述N-MID校准品用缓冲液稀释而成，浓度为0ng/mL、0.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL，缓冲液是含有0.5-5.0％BSA的Tris或PBS或HEPES缓冲液。

优选的，所述磁微粒偶联N-MID捕获抗体的制备方法为：将磁微粒用缓冲液清洗后分散；加入EDC和NHS，搅拌均匀后再加入N-MID捕获抗体，4°搅拌过夜；磁分离磁微粒，去除上清液，用缓冲液清洗磁微粒后分散；向重新分散后的磁微粒溶液中加入封闭液封闭；，磁分离磁微粒，去除上清液，用缓冲液清洗磁微粒后再次分散，得到磁微粒偶联N-MID捕获抗体溶液。

优选的，所述酶为辣根过氧化物酶。