[发明专利]25-羟基维生素D的校准品基质、制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种25‑羟基维生素D的校准品基质，用于液相色谱串联质谱法检测人血清中25‑羟基维生素D，包括：牛血清白蛋白、PBS缓冲液和添加剂，所述PBS缓冲液包括磷酸盐和水，所述添加剂选自雌二醇、雌三醇、雄烯二醇和皮质醇中的一种或多种。本发明还公开了一种校准品基质的制备方法及应用、其应用包括校准品及试剂盒。本发明中的校准品基质中，添加剂的加入使得在用液相色谱串联质谱法检测25‑羟基维生素D时，检测结果准确性更高。

技术领域

本发明涉及25-羟基维生素D检测的技术领域，特别是涉及一种校准品基质、制备方法及应用，所述应用包括校准品及试剂盒，所述校准品基质具体用于液相色谱串联质谱法检测人血清中25-羟基维生素D。

背景技术

维生素D是类固醇衍生物，主要包括维生素D2(麦角钙化醇)和维生素D3(胆钙化醇)，其主要生理作用是维持人体钙的代谢平衡和促进骨骼形成。此外，维生素D在抗肿瘤活性和免疫功能调节方面发挥着重要作用，多种慢性病(如痴呆、动脉硬化、高血压、冠心病、糖尿病、乳腺癌、肥胖、偏头痛发作频率等)的发生均与维生素D水平异常有关。血液中25-羟基维生素D是机体中维生素D的主要储存形式，与其他维生素D代谢产物相比，25-羟基维生素D具有相对较高的浓度，例如25-羟基维生素D的浓度比1,25-二羟基维生素D的浓度高出1000倍，且25-羟基维生素D不受血钙和甲状旁腺激素水平的影响，25-羟基维生素D被认为是衡量体内维生素D水平最佳指标。

液相色谱串联质谱法被认为是检测血清中25-羟基维生素D的“金标准”。多数实验室使用液相色谱串联质谱法检测人血清中25-羟基维生素D的方法是实验室自建方法，其中基质效应成为不可忽视的问题。临床上不同个体的血清样本，其基质的种类和基质的量会不一样，并且会随着存放时间发生变化，因此要合理评估样本中除了待测物以外的其他成分对待测物测定值的综合影响，以得到准确，可靠的实验结果。

在选择校准品基质时，如果校准品基质与人血清基质的基质效应有差异，会影响检测方法的准确度、精密度和选择性。一般来说，最佳的校准品基质是新鲜人血清样本基质，但是由于无生物安全危害的血源难以大量获得，因此新鲜人血清样本基质难以大批量生产，并且在不加入防腐剂、稳定剂等添加成分的情况下，其长期保存稳定性也难以保证。

为了克服新鲜人血清样本基质所存在的问题，目前虽然也存在一些采用非人源性的动物血清作为校准品基质的例子，但是在用液相色谱串联质谱法检测25-羟基维生素D的过程中，存在检测结果准确性不够的技术问题。

发明内容

基于此，有必要针对采用现有校准品基质，利用液相色谱串联质谱法检测25-羟基维生素D的过程中，检测结果准确性不够的问题，提供一种25-羟基维生素D的校准品基质、制备方法、校准品及试剂盒。

一种25-羟基维生素D的校准品基质，用于液相色谱串联质谱法检测人血清中25-羟基维生素D，包括：牛血清白蛋白、PBS缓冲液和添加剂，所述PBS缓冲液包括磷酸盐和水，所述添加剂选自雌二醇、雌三醇、雄烯二醇和皮质醇中的一种或多种。

在其中一个实施例中，在所述校准品基质中，以重量份计所述水、所述牛血清白蛋白和所述添加剂的比例为1000:(30-50):(0.0005-0.0015)。

在其中一个实施例中，所述添加剂为雌三醇。

在其中一个实施例中，在所述校准品基质中，所述添加剂为雌三醇，以重量份计所述水、所述牛血清白蛋白和所述雌三醇的比例为1000:40:0.001。

在其中一个实施例中，在所述PBS缓冲液中，所述磷酸盐与所述水的比例为(20mmol-29mmol)：1L。

一种所述校准品基质的制备方法，包括将所述牛血清白蛋白、所述PBS缓冲液和所述添加剂混合均匀，得到所述校准品基质。