[发明专利]一种用于天花粉真伪鉴定的双抗夹心酶联免疫试剂盒及其使用鉴别方法

说明书

本发明公开了一种用于天花粉真伪鉴定的双抗夹心酶联免疫试剂盒及其使用鉴别方法。该试剂盒是由TCS对照品、样品稀释液、酶标板、抗TCS的兔多克隆抗血清、抗TCS的鼠多克隆抗血清、羊抗鼠酶标二抗IgG‑HRP、包被缓冲液、洗涤液、显色液和终止缓冲液组成。利用本发明的试剂盒可以快速鉴定天花粉真伪，实验结果准确，且具有操作简便、检测快速、高通量、成本低廉的优点，对于保障天花粉的临床有效性及安全性具有十分重要的意义。

技术领域

本发明涉及一种用于天花粉真伪鉴定的双抗夹心酶联免疫试剂盒及其用于鉴别中药天花粉真伪的方法。

背景技术

天花粉(Trichosanthis Radix)为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowiiMaxim.或双边栝楼Trichosanthes rosthornii Harms的干燥根。具有清热泻火，生津止渴，消肿排脓等功效。天花粉收载于2015版《中国药典》，是临床常用中药材之一。天花粉蛋白(Trichosanthes；TCS)是天花粉的主要活性蛋白之一，具有抗早孕、抗肿瘤、抗病毒等多种活性，且TCS仅存在于正品天花粉中，是天花粉真伪鉴定的重要指标性成分。

随着天花粉价格的上涨，加上同科相近来源的植物根的误用，导致市售天花粉存在造假及掺伪现象。因此，为保障临床用药的安全有效，需要对天花粉的真伪进行鉴定。目前，天花粉的主要鉴定方法有传统鉴定方法(性状鉴定、显微鉴定、薄层色谱鉴定)和分子鉴定等，比较而言，传统鉴定方法准确性偏低，而分子鉴定方法步骤略显繁琐，且检测成本较高。所以建立一种简便、快速、成本低廉的天花粉真伪鉴定方法具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于天花粉真伪鉴定的双抗夹心酶联免疫试剂盒，该试剂盒可以用于快速识别鉴定天花粉的真伪。

本发明还提供了一种利用上述天花粉真伪鉴定的双抗夹心酶联免疫试剂盒鉴定天花粉真伪的方法。

本发明采用以下技术方案：

一种用于天花粉真伪鉴定的双抗夹心酶联免疫试剂盒，它是由TCS对照品、样品稀释液、酶标板、抗TCS的兔多克隆抗血清、抗TCS的鼠多克隆抗血清、羊抗鼠酶标二抗IgG-HRP、包被缓冲液、洗涤液、显色液和终止缓冲液组成；

所述抗TCS的兔多克隆抗血清和抗TCS的鼠多克隆抗血清是采用下述方法制备得到的：(a1)将TCS对照品用pH值为7.5的PBS缓冲液溶解至1.0mg/mL，作为免疫原；

(a2)使用步骤(a1)中的TCS免疫原分别免疫新西兰大耳兔和Bal b/c小鼠；所述免疫方法为背部皮下多点注射，免疫剂量为0.4-1.0mg/只，免疫周期为2周/次，免疫次数为4次；

(a3)4次免疫结束后，收集兔血清以获得抗TCS兔多克隆抗血清，收集小鼠血清以获得抗TCS鼠多克隆抗血清。

所述样品稀释液中Na₂HPO₄、KH₂PO₄和NaCl的浓度分别为0.02M、0.0015M和0.14M；吐温-20在样品稀释液中的体积百分含量为0.1％；明胶在样品稀释液中的质量百分含量为0.5％。

所述包被缓冲液中Na₂CO₃和NaHCO₃的浓度分别为0.01M和0.04M，溶液pH值为9.6。

所述洗涤液中Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl在洗涤液中的浓度分别为0.02M、0.0015M、0.14M，吐温-20在洗涤液中的体积百分含量为0.1％，pH值为7.5。