[发明专利]配位体及制备方法、荧光探针及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种配位体的制备方法、荧光探针及制备方法和应用。配位体为DATP，由化合物1、NaN₃、四丁基硫酸氢铵、二(2‑吡啶甲基)胺、炔丙基溴、CuI、CH₂Cl₂和CF₃COOH的混合溶剂为原料反应得到。荧光探针以DATP和Ni²⁺为核心，Eu³⁺和Ni²⁺通过Ni‑N配位键与配位体连接，Tb³通过Tb‑O和Tb‑N配位键与配位体连接。本发明的荧光探针以DATP为核心制备荧光探针，其Eu³⁺/Tb³⁺配合物用于时间分辨荧光检测，可有效消除来自样品和散射光等短寿命荧光的干扰，使制备得到的荧光探针具有很好的水溶性，极高的灵敏度，对组氨酸有很好的选择性，制备方法简单、条件温和，适用于生物体系中组氨酸的测定。

技术领域

本发明涉及一种生物技术领域，具体涉及一种配位体及制备方法、荧光探针及制备方法和应用。

背景技术

作为许多蛋白质中必需的氨基酸组分，组氨酸(His)由于其重要的生物学功能而近年来备受关注。最近的研究表明，组氨酸含量的异常通常与各种疾病有关。例如，组氨酸缺乏可能导致类风湿性关节炎，神经性耳聋，肝硬化和肺部疾病。另一方面，血清和尿液中高含量的L-组氨酸可能导致代谢紊乱或组氨酸血症。由于组氨酸具有如此重要的生理作用，准确的检测和量化组氨酸成为生物化学领域和临床应用中的一个重要任务。

目前，用于检测组氨酸的方法主要有毛细管电泳法(Zhou,L.,Yan,N.,Zhang,H.,Zhou,X.,Pu,Q.,Hu,Z.Talanta,2010,82,72-77；Zhang,L.Y.,Sun,M.X.J.Chromatogr.A.,2004,1040,133-140)、液相色谱法(Tateda,N.,Matsuhisa,K.,Hasebe,K.,MIURA,T.Ana.Sci.,2001,17,775-778)、伏安分析法(Shahlaei,M.,Gholivand,M.B.,Pourhossein,A.Electroanalysis,2009,21,2499-2502)、分光光度法(Fabbrizzi,L.,Pallavicini,P.,Parodi,L.,Perotti,A.,Taglietti,A.J.Chem.Soc.,Chem.Commun.,1995,2439)、质谱法(Furuta,T.,Katayama,M.,Shibasaki,H.,Kasuya,Y.J.Chromatogr.BBiomed.Sci.Appl.,1992,576,213-219)及共振光散射测定法(Chen,Z.,Liu,J.,Han,Y.,Zhu,L.2006,Anal.Chim.Acta.,570,109-115)等。然而这些方法需要破坏细胞或者组织结构，检测过程比较耗时，使得它们不适用于活细胞和组织内组氨酸的检测。荧光探针结合适当成像仪器的发光成像技术是一种高灵敏度和高空间分辨率的非破坏性检测目标生物分子的有用工具，目前检测组氨酸的荧光探针常采用将荧光团与金属离子形成配合物的方法来设计，其中，以铜(II)为淬灭剂的荧光团-铜(II)配合物策略是组氨酸探针设计的主要思路(You,Q.H.,Lee,A.W.M.,Chan,W.H.,Zhu,X.M.,Leung,K.C.F.Chem.Commun.,2014,50,6207-6210)；(Pu,F.,Huang,Z.,Ren,J.,Qu,X.Anal.Chem.,2010,82,8211-8216)；(Wang,B.,Gao,Y.,Li,H.W.,Hu,Z.P.,Wu,Y.Org.Biomol.Chem.,2011,9,4032-4034)；(Qiu,S.,Miao,M.,Wang,T.,Lin,Z.,Guo,L.,Qiu,B.,Chen,G.Biosens.Bioelectron.,2013,42,332-336.)。然而，这些探针由于易受到生物硫醇如半胱氨酸(Cys，大约100M)、还原型的谷胱甘肽(GSH，1-10mM)以及含巯基蛋白质的明显干扰，限制了其在细胞内组氨酸成像检测方面的应用。Yuan等人报道了一种以镍(II)为淬灭剂的荧光团-镍(II)配合物用于组氨酸的荧光检测(Gao,Q.,Song,B.,Ye,Z.,Yang,L.,Liu,R.,Yuan,J.Dalton.Trans.,2015,44,18671-18676)，由于镍(II)离子与组氨酸具有很高的亲和力，可以免受生物硫醇以及含巯基蛋白质的干扰，从而使得以镍(II)为淬灭剂的荧光团-镍(II)配合物可以用于高灵敏、高选择性地检测组氨酸。