[发明专利]一种体外维持乳腺癌干细胞干性的三维球形体培养方法有效
| 申请号： | 201910707496.9 | 申请日： | 2019-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN110396501B | 公开（公告）日： | 2020-10-30 |
| 发明（设计）人： | 张洁心;张世昌;查小明 | 申请（专利权）人： | 江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院） |
| 主分类号： | C12N5/095 | 分类号： | C12N5/095 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷 |
| 地址： | 210029 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 体外 维持 乳腺癌 干细胞 干性 三维 球形 培养 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种体外维持乳腺癌干细胞干性的三维球形体培养方法，所述的乳腺癌干细胞为术中新鲜乳腺癌组织经消化分选得到的癌干细胞, 表型为ALDH1+/CD44+/CD24-,其特征在于包括如下步骤：
1）将单细胞状态的人乳腺癌干细胞加入干细胞培养基中，制成细胞悬液；所述的人乳腺癌干细胞为术中新鲜乳腺癌组织经消化分选得到的癌干细胞,所述的细胞悬液中细胞密度为1×104～1×105个/mL; 所述的干细胞培养基为添加有10～20 ng/mL表皮生长因子EGF、10～20 ng/mL碱性成纤维生长因子bFGF、5～10 μg/mL胰岛素Insulin、 10-6 M 氢化可的松、80～150 U/mL青霉素、80～150 mg/mL链霉素的无血清乳腺上皮细胞专用培养基STEMCELL® MammoCultTM Medium；
2）向旋转生物反应器中加入细胞悬液,设置其转速为15～25转/分钟；
3）将旋转生物反应器置于细胞培养箱内培养，培养条件为：37.0～37.5℃，4.9～5.1%CO2，饱和湿度,每2～4天更换干细胞培养基一次；
4）培养2～7天，即得到合适大小乳腺癌干细胞球形体。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤2）中，旋转生物反应器由SYNTHECON公司生产。
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