[发明专利]一种VBNC细菌的复苏培养基及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 201910708995.X | 申请日： | 2019-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN110484465B | 公开（公告）日： | 2021-06-04 |
| 发明（设计）人： | 张康东 | 申请（专利权）人： | 金华康扬环境科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12R1/265 |
| 代理公司： | 北京辰权知识产权代理有限公司 11619 | 代理人： | 董李欣 |
| 地址： | 321002 浙江省金华*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 vbnc 细菌 复苏 培养基 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种VBNC细菌的复苏培养基，其特征在于，由基础培养基和藤黄微球菌(
其中，所述基础培养基按重量份数计由以下成分组成，
葡萄糖2-5份，酵母抽提物3-5份，蛋白胨2-5份，磷酸氢二钾0.2-0.3份，硫酸镁0.04-0.05份，硫酸亚铁0.01-0.02份，氯化钠0.02-0.05份，麦芽糖5-10份，谷氨酸钠2份，D-半乳糖5份，蒸馏水1000份；
所述藤黄微球菌菌液含有复苏促进因子(resuscitation promoting factor，Rpf)；
所述藤黄微球菌菌液与所述基础培养基的体积比为10-20：100。
2.如权利要求1所述的VBNC细菌的复苏培养基，其特征在于，所述藤黄球菌菌液的制备方法包括，
取藤黄微球菌接种于菌种液体培养基，25-37℃，100-150rpm培养；细菌生长至对数期后期，培养液用3000-8000rpm，10-30min离心抽提去除菌体；经0.20-0.25μm膜过滤灭菌。
3.如权利要求2所述的VBNC细菌的复苏培养基，其特征在于，所述菌种液体培养基为乳酸盐基本培养基。
4.如权利要求1-3任一项所述的VBNC细菌的复苏培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤，
(1)准确称取基础培养基的各组分，pH调至7.0-7.5，110-130℃，10-30min高压灭菌锅灭菌，制备得到基础培养基；
(2)取藤黄微球菌接种于菌种液体培养基，25-37℃，100-150rpm培养；细菌生长至对数期后期，培养液用3000-8000rpm，10-30min离心抽提去除菌体；经0.20-0.25μm膜过滤灭菌，制备得到藤黄微球菌菌液；
(3)将步骤(2)制备得到的藤黄微球菌菌液和步骤(1)制备得到的基础培养基按照体积比10-20：100混合，搅拌均匀，即制备得到所述VBNC细菌的复苏培养基。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)抽提去除菌体的条件为5000-8000rpm，15-30min离心抽提。
6.如权利要求1-3任一项所述VBNC细菌的复苏培养基在复苏和/或分离环境样品中活的但非可培养状态微生物中的应用。
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