[发明专利]一种检测血液中交沙霉素含量的在线固相萃取液相色谱法

权利要求书

1.一种检测血液中交沙霉素含量的在线固相萃取液相色谱法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)血浆样品的预处理：取待测样品，加入蛋白沉淀剂进行沉淀；

(2)标准曲线的绘制:取20uL标准工作液，加入空白血浆至1ml，混匀至成6个浓度的标准溶液，将获得的标准溶液分别加入蛋白沉淀剂进行沉淀，9000-15000rpm下离心10-15min，分别取上清液用高效液相色谱仪和DAD检测器对上述上清液进行检测，得出上述标准溶液中的交沙霉素谱图，以交沙霉素的峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有交沙霉素的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a、b及相关系数R²；该标准曲线至少用三份不同批次的标准工作液绘制三次；标准工作液是含有交沙霉素的溶液；

(3)检测血液的离心:取待检测血液至少2ml，在离心速度为3500-4500rpm下离心10-15min，得到上清液，将上述上清液置于-20℃冷冻下保存备用；

(4)待测样品的检测：

S1:用水浴加热(37℃)，将步骤(3)中的上清液复融；

S2:用移液枪移取步骤S1中复融后的上清液800-1000uL按步骤(1)进行预处理后，离心得上清液即为待测样品；

S3:移取步骤(c)待测样品600-800uL，使用高效液相色谱仪和DAD检测器对上述待测样品进行检测，得出上述待测样品的交沙霉素色谱图，将上述色谱图中的交沙霉素峰面积y代入上述步骤(2)的标准曲线方程y＝a*x+b中，通过计算得到待检测样品中交沙霉素的浓度。

2.根据权利要求1所述的液相色谱法，其特征在于：所述的蛋白沉淀剂为乙腈。

3.根据权利要求1所述的液相色谱法，其特征在于：所述步骤(2)中的标准工作液为1.0、2.5、4.0、5.5、7.5和9.0μg/mL浓度的交沙霉素溶液。

4.根据权利要求1所述的液相色谱法，其特征在于：所述步骤(2)中高效液相色谱仪包括进样模块、液相泵模块、柱温模块和检测器模块，还包括萃取泵、补液泵、六通阀、分析柱及SPE柱。

5.根据权利要求4所述的的液相色谱法，其特征在于：所述的SPE柱的流动相为0.02-0.04％的磷酸水溶液，流速为0.4-0.5mL/min，所述的SPE柱采用反冲模式。

6.根据权利要求4所述的液相色谱法，其特征在于：所述的分析柱的流动相为20％的有机相和80％的水相，所述有机相为乙腈，所述水相为0.02-0.04％的磷酸水溶液；流速为1-1.2mL/min，所述分析柱采用梯度洗脱方式。

7.根据权利要求根据权利要求1所述的液相色谱法，其特征在于：所述步骤(2)中所述DAD检测器的检测波长为242nm。