[发明专利]一种检测血液中交沙霉素含量的在线固相萃取液相色谱法

说明书

本发明属于医学检验领域，涉及体内抗菌药物含量测定方法，具体涉及一种检测血液中交沙霉素含量的在线固相萃取液相色谱法。种检测血液中交沙霉素含量的在线固相萃取液相色谱法，对待测血样进行预处理后，通过高效液相色谱仪采用标准曲线法测定交沙霉素含量本发明所述的检测血液中交沙霉素药物浓度的在线固相萃取液相分析方法，血浆经过蛋白沉淀后直接进样，减少了人员操作，提高了定量结果的准确性。

技术领域

本发明属于医学检验领域，涉及体内抗菌药物含量测定方法，具体涉及一种检测血液中交沙霉素含量的在线固相萃取液相色谱法。

背景技术

交沙霉素是单一组分的14碳大环内酯类抗生素，其药理特点和临床应用与麦迪霉素、螺旋霉素相仿。主要是与细菌50S核糖体亚基结合，通过阻断转肽作用和mRNA移位而抑制细菌蛋白质的合成，从而起抗菌作用。抗菌性能与红霉素相近似。对葡萄球菌、链球菌属、梭状芽胞杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌、奈瑟菌属、军团菌、布氏杆菌、弯曲杆菌、支原体、衣原体和立克次体等有抗菌作用。交沙霉素对脑膜炎球菌、百日咳杆菌、消化球菌、消化链球菌、丙酸杆菌、真杆菌等具有良好抗菌作用。交沙霉素的当血药浓度＞5.0mg/L时，毒副作用增强。可引起胃肠道反应：恶心，呕吐，食欲不振，腹胀，腹泻。由于VCMC治疗窗较窄，体内代谢过程存在较大的个体差异，所以对其血药浓度的监测是调整剂量，减少不良反应的重要参考，在临床用药中具有重大意义。

目前常用的交沙霉素血药浓度的测定方法众多，但目前仍存在前处理复杂、成本高，或对实验人员和环境要求高，分析时间较长等问题。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的现状，提供一种检测血液中交沙霉素含量的在线固相萃取液相色谱法。

本发明为解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种检测血液中交沙霉素含量的在线固相萃取液相色谱法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)血浆样品的预处理：取待测样品，加入蛋白沉淀剂进行沉淀；

(2)标准曲线的绘制:取20uL标准工作液，加入空白血浆至1ml，混匀至成6个浓度的标准溶液，将获得的标准溶液分别加入蛋白沉淀剂进行沉淀，9000-15000rpm下离心10-15min，分别取上清液用高效液相色谱仪和DAD检测器对上述上清液进行检测，得出上述标准溶液中的交沙霉素谱图，以交沙霉素的峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有交沙霉素的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a、b及相关系数R²；该标准曲线至少用三份不同批次的标准工作液绘制三次；标准工作液是含有交沙霉素的溶液；

(3)检测血液的离心:取待检测血液至少2ml，在离心速度为3500-4500rpm下离心10-15min，得到上清液，将上述上清液置于-20℃冷冻下保存备用；

(4)待测样品的检测：

S1:用水浴加热(37℃)，将步骤(3)中的上清液复融；

S2:用移液枪移取步骤S1中复融后的上清液800-1000uL按步骤(1)进行预处理后，离心得上清液即为待测样品；

S3:移取步骤(c)待测样品600-800uL，使用高效液相色谱仪和DAD检测器对上述待测样品进行检测，得出上述待测样品的交沙霉素色谱图，将上述色谱图中的交沙霉素峰面积y代入上述步骤(2)的标准曲线方程y＝a*x+b中，通过计算得到待检测样品中交沙霉素的浓度。

所述的蛋白沉淀剂为乙腈。

进一步的，所述步骤(2)中的标准工作液为1.0、2.5、4.0、5.5、7.5和9.0μg/mL浓度的交沙霉素溶液。