[发明专利]一种金果榄雌株脱毒苗培养方法

说明书

本发明公开了一种金果榄雌株脱毒苗培养方法，包括以下步骤：包括以下步骤：金果榄雌株的选择、金果榄雌株茎尖表面消毒、金果榄雌株茎尖剥离、病毒检测与脱毒株系建立、金果榄雌株脱毒苗的快速繁殖、金果榄雌株脱毒苗驯化培养。本发明选择金果榄雌株作为采集对象，驯化获得的均是脱毒金果榄雌株，种植后都会开花结果；采用的是植株茎尖生长点分生组织，该部位细胞含病毒较少或不含病毒，并经过病毒检测合格，所生产的苗株是不含病毒的，可恢复植物原有性状，显著提高金果榄的块茎品质、产量，降低病虫害带来的种植风险；本发明利用植物细胞的全能性，通过本发明的扩繁培养方法建立了一个完整的无菌繁殖系统，大大提高育苗产量和品质。

技术领域

本发明涉及植物栽培技术领域，具体涉及一种金果榄雌株脱毒苗培养方法。

背景技术

金果榄为青牛胆属常绿缠绕藤本植物，主产于四川、湖南、广西、湖北、贵州等地，具有清热解毒、利咽止痛的功效，内服主治各种炎症，如咽喉肿疼、扁桃体炎，急性肠胃炎、痈疽疗毒、泄泻、痢疾脘腹热痛等。外用制膏、磨汁涂擦或研末调抹，用于治疗静脉炎、毒蛇咬伤等症。金果榄块根含掌叶防己碱(Palmatine)防已内酯（columbin），异防已内酯（isocolumbin），药根碱（jatrrhizine），金果榄甙（tinoside）。根含掌叶防已碱，药根碱，非洲防已碱（coumbamine），千金藤宁碱（stepharanine），去氢分离木瓣树胺（dehydrodiscretamine），蝙蝠葛任碱（menisperine），木兰花碱（magnoflorine），2-脱氧-甲壳甾酮（2-deoxycrustecdysone），2-脱氧-3-表甲壳甾酮（2-deoxy-3-epicrustecdysone），2-去氧甲壳壳甾酮-3-0-β吡喃葡萄糖甙（2-deoxycrustecdysone-3-O-β-glucopyra-noside），民间广泛用于治疗胃病。现代药理学研究表明，金果榄具有明显的抗炎镇痛、抗菌、抗肿瘤、降血压、应急解毒等作用，被喻为可替代抗生素的天然药物。

在实现本发明的过程中，发明人发现：

由于掠夺式采挖，金果榄野生资源濒危灭绝，同时在利益驱使下，金果榄藤茎也遭到灭绝式砍伐用于扦插育苗，特别是赖以快速繁殖的金果榄雌株（种子繁殖，金果榄属于雌雄异株，野生状况下雌雄比约1:50）也遭到灭顶之灾。

目前，在现有技术中对于金果榄育苗繁殖方面研究较多，多采用块茎繁殖、扦插繁殖、种子繁殖、组织培养诱导丛生芽繁殖等。金果榄属于多年生藤本块茎植物，由于病毒的长期积累，植株的病虫害会不断上升，生长状态和产量会不断下降，给种植户带来巨大损失。

发明内容

本发明目的是为了解决金果榄资源短缺，及现有人工育苗繁殖技术中存在的未根除病毒导致成活率低的问题，提供一种金果榄雌株脱毒苗培养方法。

为此本发明的技术方案为：一种金果榄雌株脱毒苗培养方法，其特征在于包括以下步骤：

1）金果榄雌株的选择：金果榄雌株选择野生状态下，采集前2-3年开花结果正常，植株健壮，无病虫害的金果榄雌株作为材料采集对象；采集时间选择在每年3-6月，植株开花前，挑选主茎或侧茎生长旺盛的茎尖作为外植体；

2）金果榄雌株茎尖表面消毒：采集来的茎尖剪取茎尖1-1.5厘米，自来水添加洗洁精清洗表面附着脏物，用自来水流水冲洗10分钟，用0.3%新洁尔灭溶液浸泡表面杀菌20分钟，纯净水流水冲洗2小时，移入事先准备好的超净工作台备用；在超净工作台内先用75%酒精浸泡外植体30秒，无菌水冲洗2次，然后置于0.1%氯化汞溶液中浸泡15-20分钟，用无菌水冲洗3-5次取出放置在无菌滤纸上吸干表面水分备用；

3）金果榄雌株茎尖剥离：在已灭好菌的超净工作台内，在解剖显微镜下剥取金果榄茎尖带1-2个叶原基的约0.15-0.2mm生长点，将剥离下茎尖接种于快速生长1号培养基上培养45天获得完整金果榄雌株；