[发明专利]一种ɑ-吡喃酮化合物、制备方法，菌株及应用

权利要求书

1.一种式(I)所示ɑ-吡喃酮化合物在制备肿瘤细胞活性抑制剂中的应用，其特征在于所述肿瘤细胞为人肺癌细胞株A549，人肝癌细胞株Bel-7402或人结肠癌细胞株HCT-8；

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述ɑ-吡喃酮化合物按如下方法制备：(1)发酵培养：将烟曲霉(Aspergillus fumigatus)D和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)ZZP-R1分别接种至大米培养基的两侧，中间预留2-3cm宽度的培养基不接种菌株，在28℃恒温静置培养40-50天，在无菌操作下将两种菌的发酵混合物搅拌混合均匀，28℃下静置培养5天，获得发酵产物；所述大米培养基终浓度组成为：大米400-500g/L，溶剂为蒸馏水；所述烟曲霉(Aspergillus fumigatus)D保藏编号为CGMCC No.17762；所述尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)ZZP-R1保藏编号为CGMCC No.17763；(2)ɑ-吡喃酮化合物的分离纯化：①将步骤(1)制备的发酵产物，用等体积乙酸乙酯在超声辅助下萃取，过滤，有机层浓缩至无液体流出，得到浓缩物；②用甲醇溶解步骤①浓缩物得到悬浮液，再用两倍悬浮液体积的正己烷萃取，得到正己烷萃取层和甲醇层，将甲醇层用两倍体积的二氯甲烷萃取，得到二氯甲烷萃取层；将二氯甲烷萃取层浓缩至无液体流出，获得浸膏；③将步骤②浸膏用正己烷溶解后上硅胶层析柱，以体积比99:1或98:2的二氯甲烷和甲醇为洗脱液，分别收集第15min或第12.5min出峰的流出液，真空去除流动相，得到式(I)所示ɑ-吡喃酮类化合物。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于步骤(2)所述超声辅助条件为：40KHz超声15-20min。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于步骤③中硅胶柱规格为50cm*5cm，填充5倍浸膏量的200目硅胶。

5.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述烟曲霉D和尖孢镰刀菌ZZP-R1接种至大米培养基前，先进行活化和种子扩大培养，再分别以体积浓度5％的接种量将种子液接种至大米培养基中，所述活化和种子扩大培养方法为：

(1)活化培养：将菌株D和菌株ZZP-R1接种至PDA斜面培养基，28℃培养箱保湿培养3-4天，活化菌种；PDA斜面培养基终浓度组成为：蔗糖20g/L，马铃薯200g/L，琼脂15-18g/L，溶剂为蒸馏水，自然pH值；

(2)种子培养：从活化菌落中挑取一接种环菌体接种至PDB种子培养基，在200rpm、28℃条件下摇床培养3天，分别获得菌株D种子液和菌株ZZP-R1种子液；PDB种子培养基终浓度组成为：土豆200g/L，蔗糖20g/L，溶剂为蒸馏水，pH自然。