[发明专利]一种ɑ-吡喃酮化合物、制备方法，菌株及应用

说明书

本发明公开了一种ɑ‑吡喃酮化合物、制备方法，菌株及应用，本发明提供一种两株真菌在大米培养基上进行共培养的方法；本发明发酵大量产生的一种ɑ‑吡喃酮化合物(I)，产率达到4％，在抗肿瘤方面有一定的活性，后期可以进行结构修饰，制备其衍生物来大幅度提高其抗肿瘤活性，从而制备抗肿瘤药物；化合物I对A549人肺癌细胞株的抑制率为23.54％。本发明的ɑ‑吡喃酮化合物采用微生物发酵生产，操作工艺简单，周期短，成本低，对环境无污染。

(一)技术领域

本发明涉及一种ɑ-吡喃酮化合物、制备方法，菌株及应用。

(二)背景技术

新型活性药物先导化合物的发现一直是药物化学家关注的热点。在从动植物资源寻找潜在药物远不能满足人类对疾病的治疗需求的情况下，微生物(主要是真菌和细菌)由于其繁殖快、易于培养等特点使其成为寻找新活性天然产物的重要选择。

研究表明，植物内生菌是微生物中丰富的功能性产物的重要组成。而滨海地区作为海洋和陆地的过渡带，其植物的生存环境非常特殊，既具有与海洋和陆地植物共同的一面，又有着不同于它们的独特一面，如沼泽化、盐渍化等。因此滨海植物的内生真菌作为海洋来源的真菌的一种，也有着更加不一样的生存和代谢机制，更易产生结构新颖活性较高的药物先导化合物。

目前ɑ-吡喃酮类化合物制备方法主要有化学合成和生物转化两种，其中化学合成目的性强、生产方便、生产条件可控、投资小、见效快，缺点是大多对环境有污染，产生三废治理花费高。而生物合成主要通过生物体的代谢来合成特定药物，是现代发酵工程、基因工程的扩展，该法对环境污染较小，适用于大规模生产药物。简而言之就是利用微生物将药物前体合成药物的过程。生物合成是现代药学发展的一个未来趋势，本专利提供的ɑ-吡喃酮化合物是通过微生物发酵产生的。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种ɑ-吡喃酮化合物、制备方法，菌株及应用，解决了这种ɑ-吡喃酮化合物大规模生产的问题，该方法为生物合成方法，对环境无污染，且此化合物具有一定的抗肿瘤活性，对活性药物先导化合物的发现起到促进作用。

本发明采用的技术方案是：

第一方面，本发明提供一种式(I)所示ɑ-吡喃酮化合物，具有如下化学结构：

第二方面，本发明提供一种所述式(I)所示ɑ-吡喃酮化合物的制备方法，所述方法为：(1)发酵培养：将烟曲霉(Aspergillus fumigatus)D和尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)ZZP-R1分别接种至大米培养基的两侧，中间预留2-3cm宽度的培养基不接种菌株，在28℃恒温静置培养40-50天，在无菌操作下将两种菌的发酵混合物搅拌混合均匀，28℃下静置培养5天，获得发酵产物；所述大米培养基终浓度组成为：大米400-500g/L，溶剂为蒸馏水；(2)ɑ-吡喃酮化合物的分离纯化：①将步骤(1)制备的发酵产物，用等体积乙酸乙酯在超声辅助下萃取，过滤，有机层(优选40℃低温真空浓缩)浓缩至无液体流出，得到浓缩物；②用甲醇溶解步骤①浓缩物得到悬浮液，再用两倍悬浮液体积的正己烷萃取(优选3次)，得到正己烷萃取层和甲醇层，将甲醇层用两倍体积的二氯甲烷萃取(优选3次)，得到二氯甲烷萃取层；将二氯甲烷萃取层浓缩至无液体流出(优选45℃低温真空浓缩)，获得浸膏；③将步骤②浸膏用正己烷(优选正己烷体积用量以浸膏重量计为5ml/g)溶解后上硅胶层析柱，以体积比99:1或98:2的二氯甲烷和甲醇为洗脱液，分别收集第15min或第12.5min出峰的流出液，真空去除流动相(优选50℃低温)，得到式(I)所示ɑ-吡喃酮类化合物。

所示液相仪器：UV-VIS，检测器：岛津SPD-16；高效液相输液泵：岛津LC-16P；色谱条件：C₁₈色谱柱250×9.4mm，流速3.0mL/min，柱温30℃，检测波长210nm；流动相组成体积比分别为40:60的双蒸水:乙腈和35:65的双蒸水:甲醇。