[发明专利]一种显脉獐牙菜的人工高效繁殖方法

权利要求书

1.一种显脉獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、将显脉獐牙菜的带节茎段外植体消毒灭菌处理；

步骤二、带节茎段外植体接种于愈伤组织诱导和基茎丛生芽发生培养基上培养至褐化现象完全消除得到增殖芽；

步骤三、将增殖芽接种到丛芽发生和增殖同步培养基中，得到高3-4 cm的健壮主苗；

步骤四、将健壮主苗接种在生根苗培养基中培养至生根得到生根苗；

步骤五、选择6-8 cm高的生根苗置于室温下炼苗，后移栽至消毒后的腐殖质中保温保湿培养，得到移栽苗；

所述步骤二中，愈伤组织诱导和基茎丛生芽发生培养基由如下成分组成：

改良的MS培养液 MS大量元素中的NH₄NO₃改为3/4 NH₄NO₃，同时KNO₃改为3/4KNO₃

硫代硫酸钠Na₂S₂O₃ 5000-10000 mg/L

6-苄胺基嘌呤6-BA 1.5-2.0 mg /L

萘乙酸NAA 0.1-0.5 mg/L

蔗糖 30000 mg/L

琼脂粉 4800 mg/L

pH 5.4-5.8

培养条件为：在光照度2000-2500 lx，光照时间12 h/d，温度控制在22±1℃的条件下进行愈伤组织和腋芽萌发诱导，10 d后节上腋芽开始萌发并迅速生长，20 d后材料基部产生疏松的愈伤组织，45 d后基茎节上出现致密的丛生芽，将丛生芽切割为3-5株一丛，转接至相同的新的愈伤组织诱导和基茎丛生芽发生培养基中继续培养45 d，重复培养3-4次，至褐化现象完全消除；

所述步骤三中，丛芽发生和增殖同步培养基由如下成分组成：

改良的MS培养液 MS大量元素中的NH₄NO₃改为3/4 NH₄NO₃，同时KNO₃改为3/4KNO₃

6-苄胺基嘌呤6-BA 1.5-2.0 mg /L

萘乙酸NAA 0.1-0.5 mg/L

蔗糖 30000 mg/L

琼脂粉 4800 mg/L

pH 5.4-5.8

培养条件为：在光照度2000-2500 lx，光照时间12 h/d，温度控制在22±1℃的条件下培养40 d；

所述步骤四中，生根苗培养基由如下成分组成：

改良的MS培养液 MS大量元素中的NH₄NO₃改为3/4 NH₄NO₃，同时KNO₃改为3/4KNO₃

蔗糖 30000 mg/L

琼脂粉 4800 mg/L

pH 5.4-5.8

培养条件为：在光照度2000-2500 lx，光照时间12 h/d，温度控制在22±1℃的条件下，培养40 d获得苗壮根粗的生根苗。

2.如权利要求1所述的显脉獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，所述步骤一中，带节茎段外植体长度为1.5-2.0 cm，带1-2个节茎段。

3.如权利要求1所述的显脉獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，所述步骤一中，消毒灭菌处理的方法为：先用自来水清洗显脉獐牙菜的带节茎段外植体表面的泥土和灰尘，再放到流水下冲洗2 h后，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒60 s，再用质量百分比为0.1％的HgCl₂灭菌10min，最后用无菌水冲洗8次后放在无菌滤纸上吸干表面水分，最终得到消毒灭菌处理的显脉獐牙菜的带节茎段外植体。

4.如权利要求1所述的显脉獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，所述步骤五中，取步骤四中6-8 cm高的生根苗置于室温下炼苗3 d后，从培养基中取出生根苗，将残留培养基清洗干净，放入质量浓度0.1-0.2%的多菌灵溶液中消毒2-3 min，后移栽至消毒后的腐殖质中培养，生长30 d后，即得移栽苗。