[发明专利]一种显脉獐牙菜的人工高效繁殖方法

说明书

本发明公开了一种显脉獐牙菜的人工高效繁殖方法，本发明在同一培养基中，可同时进行愈伤组织诱导和基茎丛生芽发生，同时进行基茎丛生芽发生和增殖培养，将培养程序简化为了三步；整个快速繁殖过程只需三种培养基就解决了从愈伤组织、基茎丛生芽发生和增殖、克服褐化及玻璃化现象以及生根问题，节省了接种程序和培养空间，利于安排生产计划；此外由于减少了接种次数，降低了污染的可能性，且愈伤组织诱导和增殖培养的培养基中均有基茎丛生芽发生的功能，使得生物材料更换培养基是更容易适应，从而提高生物材料组培的成功率，大大提高了繁殖系数。

技术领域：

本发明涉及中草药繁殖技术，尤其涉及一种显脉獐牙菜的人工高效繁殖方法。

背景技术：

显脉獐牙菜(Swertia nervosa(G.Don)Wall.)，为龙胆科(Gentianaceae)獐牙菜属(Swertia)一、二年生草本，又名肝炎草、四棱草、山黄连、青鱼草等，主要分布于我国西南—喜马拉雅地区，生于海拔460～2700m的河滩、山坡、疏林下和灌木丛中。显脉獐牙菜在西南地区，是土家族民间常用的一种民族药，其所含化学成分主要为獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、齐墩果酸及1,7-二羟基-3,8-二甲氧基酮等多种酮类，具有清热解毒、清肝利胆、镇静镇痛等功效，在治疗黄疸型肝炎、胆囊炎、肝硬化上具有独特疗效，对急性胃肠炎、毛发脱落亦有良好疗效。此外，有研究显示显脉獐牙菜水提取液对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林表皮葡萄球菌等的生长均具有较明显的抑制作用。

近年来由于对显脉獐牙菜的研究不断增多，药材用量也不断加大，而显脉獐牙菜多在花期采收，因此对其自然繁衍造成严重威胁，进而导致野生资源的迅速丧失。显脉獐牙菜通常以其种子为繁殖单位，但萌发率低，实生苗生长缓慢且生物量较小、后代变异大，并受到萌发季节的限制，难以进行规模化、标准化(基因型背景一致)种植和高药效品种的大面积推广。因此，需要寻求一种新的成本低、时间短、质量和成活率高，且能将优良性状固定下来的高效人工繁殖方法来扩大显脉獐牙菜种苗的繁殖量，进行其高品质种苗的工厂化生产，以满足种植需求。

目前也有对显脉獐牙菜进行组培，从而提高其繁殖速度和繁殖量的方法，但是现有的组配方法，愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生、增殖、生根四个阶段分别需要使用四种不同的培养基和培养条件，同时需要进行四次接种。而在组培领域，每次接种均有染菌的可能，即每多一次接种，最终得到的组培苗就会按照染菌几率减少对应的量。且四次培养需要消耗大量的培养瓶和培养场地，对于有限的组培面积来说，大大降低了其组培苗的生产速度。再次，由于四个阶段的培养基功能没有重合，使得培养过程中，生物材料每进入下一组培养基中时需要一个较长的适应过程，且更容易出现褐化、黄化等现象。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种显脉獐牙菜的人工高效繁殖方法，本发明在同一培养基中，可同时进行愈伤组织诱导和基茎丛生芽发生，同时进行基茎丛生芽发生和增殖培养，将培养程序简化为了三步；整个快速繁殖过程只需三种培养基就解决了从愈伤组织、基茎丛生芽发生和增殖、克服褐化及玻璃化现象以及生根问题，节省了接种程序和培养空间，利于安排生产计划；此外由于减少了接种次数，降低了污染的可能性，且愈伤组织诱导和增殖培养的培养基中均有基茎丛生芽发生的功能，使得生物材料更换培养基是更容易适应，从而提高生物材料组培的成功率，大大提高了繁殖系数。

为解决上述问题，本发明的技术方案是：

一种显脉獐牙菜的人工高效繁殖方法，包括如下步骤：

步骤一、将显脉獐牙菜的带节茎段外植体消毒灭菌处理；

步骤二、带节茎段外植体接种于愈伤组织诱导和基茎丛生芽发生培养基上培养至褐化现象完全消除得到增殖芽；

步骤三、将增殖芽接种到丛芽发生和增殖同步培养基中，得到高3-4cm的健壮主苗；

步骤四、将健壮主苗接种在生根苗培养基中培养至生根得到生根苗；