[发明专利]利用GPC-GC/MS/MS测定肉制品中N-亚硝胺类化合物的方法

权利要求书

1.一种利用GPC-GC/MS/MS测定肉制品中N-亚硝胺类化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)超声提取

将肉制品粉碎，称取10g～12g样品，具体质量记为m，加入20mL二氯甲烷，超声提取20min，过滤后收集滤液，用二氯甲烷定容至25mL；

(2)GPC净化

步骤(1)所得滤液利用GPC净化处理，GPC色谱条件为：凝胶渗透色谱柱：32cm×2.5cm，凝胶填料Bio Beads S-X3，200-400目；流动相：二氯甲烷；流速：5.0mL/min；进样量：5.0mL；紫外检测波长：254nm；弃去前16min色谱流出液，收集17-47min流分，淋洗3min；

(3)在线浓缩

所收集流分通过在线浓缩装置定量浓缩，温度参数：水加热温度36℃，锥底部温度38℃，定容至1～5mL，具体体积记为V，所得即为样品处理液；

(4)GC/MS/MS检测

N-亚硝胺类化合物标准溶液及样品处理液利用气相色谱-三重四级杆串联质谱进行检测；

色谱条件为：

色谱柱：极性毛细管色谱柱VF-WAXms；载气：He；流速：1mL/min；进样口温度：250℃；升温 程序：40℃，10℃/min升温至100℃，15℃/min升温至250℃；后运行：250℃，3min；进样体积：1μL；分流方式：不分流；

质谱参数为：

离子源：EI；离子源温度：230℃；MS1四级杆温度：150℃；MS2四级杆温度：150℃；电离能量：70eV；溶剂延迟时间：6min；传输线温度：280℃；碰撞气流量：1.5mL/min；淬灭气流量：2.25mL/min；

(5)定性及定量分析

通过比较N-亚硝胺类化合物标准溶液各组分与样品处理液所得结果的保留时间及相应化合物子离子丰度比进行定性分析；通过分析不同浓度N-亚硝胺类化合物工作标准溶液，获取相应的标准曲线，求得肉制品样品进样液中相应的N-亚硝胺类化合物浓度c以及空白对照中N-亚硝胺类化合物浓度c₀，则肉制品样品中N-亚硝胺类化合物的含量由下式计算：

w＝5V(c-c₀)/m，

其中，N-亚硝胺类化合物的含量w的单位为μg/kg；N-亚硝胺类化合物浓度c的单位为μg/L；空白对照中N-亚硝胺类化合物浓度c₀；m为所称取肉制品样品质量，g；V为浓缩定容后体积，mL；

所述N-亚硝胺类化合物包括：N-二甲基亚硝胺、N-甲基乙基亚硝胺、N-二乙基亚硝胺、N-二丙基亚硝胺、N-二丁基亚硝胺、N-亚硝基哌啶、N-亚硝基吡咯烷、N-二苯基亚硝胺、N-亚硝基吗啉。

2.根据权利要求1所述的利用GPC-GC/MS/MS测定肉制品中N-亚硝胺类化合物的方法，其特征在于，各N-亚硝胺类化合物监测离子参数包括分段扫描时间、前级离子、产物离子、驻留时间、碰撞能量、增益，具体见下表：

多反应监测的条件

*为定量离子。