[发明专利]利用GPC-GC/MS/MS测定肉制品中N-亚硝胺类化合物的方法

说明书

本发明提供一种利用GPC‑GC/MS/MS测定肉制品中N‑亚硝胺类化合物的方法，包括如下步骤：(1)超声提取；(2)GPC净化；(3)在线浓缩；(4)GC/MS/MS检测；(5)定性及定量分析。本发明采用凝胶渗透色谱净化、在线浓缩进行样品前处理并利用气相色谱‑串联质谱进行检测，操作便捷，可以实现批量样品高效处理，同时，具有更高的灵敏度，对于痕量成分的检出具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种利用GPC-GC/MS/MS测定肉制品中N-亚硝胺类化合物的方法，具体涉及一种基于GPC前处理、利用气相色谱-三重四级杆串联质谱进行分析的检测方法。

背景技术

N-亚硝胺化合物是强致癌性物质，具有致畸和致突变作用，种类繁多，具有下式所示的典型结构，在自然界中存在于空气、土壤、水体以及食品等物质中。

肉制品中特别是采用腌制、烟熏、焙烤等工艺加工生产的产品污染亚硝胺类化合物的风险很高，主要源于其中存在的亚硝酸盐、硝酸盐及胺等前体物质。亚硝酸盐、硝酸盐作为护色剂、防腐剂在肉制品加工过程被使用，而肉制品中蛋白质会分解产生胺，它们在适宜的条件下发生反应产生N-亚硝胺化合物。

目前，我国现行有效的GB 2762-2017《食品安全国家标准食品中污染物限量》将亚硝胺类化合物中的N-二甲基亚硝胺列为化学性危害物质，对肉制品(肉类罐头除外)及熟肉干制品、水产制品(水产品罐头除外)及干制水产品作了限量要求，其限值要求较低，最大限量分别为3μg/kg、4μg/kg。而N-二甲基亚硝胺检测所依据的方法标准为GB 5009.26-2016《食品安全国家标准食品中N-亚硝胺类化合物的测定》，涉及气相色谱-质谱法和气相色谱-热能分析仪法两种方法，所涉及的前处理过程均包括水蒸气蒸馏提取、液液萃取净化、浓缩处理等，操作较为复杂、繁琐，难以实现批量样品处理。

肉制品基质复杂，干扰因素很多，主要包括脂肪、蛋白质、色素等，影响仪器分析检测结果。凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography，GPC)是一种基于分子量大小实现分离的色谱技术，常应用于食品样品净化前处理，能够有效去除脂肪、蛋白质、色素、多糖类等大分子干扰。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用GPC-GC/MS/MS测定肉制品中N-亚硝胺类化合物的方法，使用GPC净化、在线浓缩处理样品，操作便捷，可以实现批量样品高效处理，同时利用GC/MS/MS提高了检测方法的灵敏度，满足检测要求。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种利用GPC-GC/MS/MS测定肉制品中N-亚硝胺类化合物的方法，包括如下步骤：

(1)超声提取

将肉制品粉碎，称取10g～12g的样品，具体质量记为m，加入20mL二氯甲烷，超声提取20min，过滤后收集滤液，用二氯甲烷定容至25mL；

(2)GPC净化

步骤(1)所得滤液利用GPC净化处理，GPC色谱条件为：凝胶渗透色谱柱：32cm×2.5cm，凝胶填料Bio Beads S-X3，200-400目；流动相：二氯甲烷；流速：5.0mL/min；进样量：5.0mL；紫外检测波长：254nm；弃去前16min色谱流出液，收集17-47min流分，淋洗3min；

(3)在线浓缩

所收集流分通过在线浓缩装置定量浓缩，温度参数：水加热温度36℃，锥底部温度38℃，定容至1～5mL，具体体积记为V；

(4)GC/MS/MS检测

N-亚硝胺类化合物标准溶液及样品处理液利用气相色谱-三重四级杆串联质谱进行检测；

色谱条件为：