[发明专利]一种抑制酵母提前絮凝因子产生的方法

权利要求书

1.一种木聚糖酶抑制剂的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1。

2.权利要求1所述的基因编码的木聚糖酶抑制剂的氨基酸序列为SEQ ID NO：2。

3.一种木聚糖酶抑制剂的表达载体，其特征在于，包括权利要求1所述基因序列的重组质粒。

4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的构建方法如下：通过引物扩增木聚糖酶抑制剂的基因序列，将扩增后的基因序列经EcoR I和Xba I双酶切后，插入pGAPZαA载体，构建组成型GAP表达载体。

5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，利用引物扩增木聚糖酶抑制剂的基因，上游引物和下游引物分别如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。

6.一种木聚糖酶抑制剂的表达方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求4或权利要求5构建好的组成型GAP表达载体用限制性内切酶BlnI(AvrII)线性化，然后通过电转，将其转进酵母的感受态细胞中并筛选转化子；将筛选到的菌株，接种于酵母提前絮凝培养基中，30℃恒温摇床振荡培养1-5d；发酵结束后，4℃离心，收集上清液，即可。

7.权利要求6所得木聚糖酶抑制剂的纯化方法，其特征在于，将上清液过0.22μm膜，经过HisTrapTM excel色谱柱，得纯化后的木聚糖酶抑制剂，采用SDS-PAGE电泳检验分离效果。

8.一种如权利要求1所述的木聚糖酶抑制剂抑制酵母提前絮凝因子产生的方法，其特征在于，取权利要求1所得木聚糖酶抑制剂的核苷酸序列，经载体构建、转化、表达和分离纯化后得木聚糖酶抑制剂，将其用于啤酒发酵过程，即可。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述啤酒发酵过程使用如下：将内切木聚糖酶50U溶于100mL醋酸钠溶液中，加入0.5g木聚糖，及2L发酵液分离纯化的rHVXI约80mg，37℃酶解，10000g离心5min，收集上清液，并加入40％(v/v)乙醇对酶解液中的多糖进行4℃沉淀过夜，12000g离心10min去除上清，沉淀用1mL热水溶解备用，其中，醋酸钠溶液如下：0.1mol·L^-1，pH 5.5，牛白蛋白含量0.5mg·mL^-1。