[发明专利]一种在肿瘤基质中释放抗癌药物的负载药物纳米胶束的制备方法及其产品和应用

权利要求书

1.一种在肿瘤基质中释放抗癌药物的负载药物纳米胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：β-天门冬氨酸苄酯的制备

取100mL苯甲醇，加入10mL浓硫酸搅拌混合后，加入13.3g天冬氨酸，室温下搅拌反应24h，加入200mL95％体积的乙醇，再边搅拌边滴加50mL吡啶，滴加完后，将混合液冰冻过夜，再取出恢复至室温，抽滤得到滤饼，对滤饼清洗抽干后，重结晶两次，得到β-天门冬氨酸苄酯；

步骤2：苄氧羰基天冬氨酸酸酐的制备

取10g步骤1制得的β-天门冬氨酸苄酯，在氮气保护下加入200mL乙酸乙酯，在90℃下回流反应，反应至溶液为澄清结束，得到含苄氧羰基天冬氨酸酸酐的溶液，经冷却、洗涤萃取，取上层液体，经干燥、过滤和浓缩，再进行重结晶，得到苄氧羰基天冬氨酸酸酐；

步骤3：聚天冬氨酸苄酯聚合物的制备

取50mL CH₂Cl₂溶液,加入74μL的正丁胺，得到溶有正丁胺的CH₂Cl₂溶液；取2.84g步骤2制得的苄氧羰基天冬氨酸酸酐，加入5mL的N,N-二甲基甲酰胺进行溶解，将溶解后的溶液加入到上述溶有正丁胺的CH₂Cl₂溶液中，充分混合后，密封置于35℃油浴中搅拌反应72h，反应后经蒸馏沉淀处理，再将沉淀物冷冻过夜后，取出恢复至室温，经离心、洗涤和真空干燥后，得到聚天冬氨酸苄酯聚合物；

步骤4：羧基化-聚天冬氨酸苄酯聚合物的制备

取2.7g步骤3制得的聚天冬氨酸苄酯聚合物，加入30mL的CHCl₃，搅拌溶解，再加入0.43g丁二酸酐，在70℃下，搅拌回流反应48h，得到含羧基化-聚天冬氨酸苄酯聚合物的溶液，经清洗冷冻干燥后，得到羧基化-聚天冬氨酸苄酯聚合物；

步骤5：羧基化-聚天冬氨酸二甲基乙二胺聚合物的制备

取1.8g步骤4制得的羧基化-聚天冬氨酸苄酯聚合物，加入8mL的N,N-二甲基甲酰胺进行溶解，再加入0.35mL的N,N-二甲基乙二胺，混合均匀后置于35℃油浴中，搅拌反应48h，反应完毕后经甲醇透析，得到羧基化-聚天冬氨酸二甲基乙二胺聚合物；

步骤6：聚天冬氨酸二甲基乙二胺-聚天冬氨酸苄酯聚合物的制备

取0.6g步骤5制得的羧基化-聚天冬氨酸二甲基乙二胺聚合物，加入二甲基亚砜溶解，加入0.115g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.069g的N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌30min，进行活化，再加入0.73g步骤3制得的聚天冬氨酸苄酯聚合物，反应48h后，以甲醇透析后，得到聚天冬氨酸二甲基乙二胺-聚天冬氨酸苄酯聚合物；

步骤7：聚(天冬氨酸-二甲基乙二胺)-聚(天冬氨酸-巯基乙胺)聚合物的制备

取0.5g步骤6制得的聚天冬氨酸二甲基乙二胺-聚天冬氨酸苄酯聚合物，加入32mg巯基乙二胺，在35℃和氮气保护下反应，反应结束后过滤，取沉淀物，以甲醇透析后，得到聚(天冬氨酸-二甲基乙二胺)-聚(天冬氨酸-巯基乙胺)聚合物；

步骤8：在肿瘤基质中释放抗癌药物的负载药物纳米胶束的制备

取步骤7制得的聚(天冬氨酸-二甲基乙二胺)-聚(天冬氨酸-巯基乙胺)聚合物，加入到过量二甲基亚砜溶液中溶解后，加入待负载的抗癌药物，过滤，在碱性水和超声作用下自组装为胶束，再在无氧气水中透析，即得到在肿瘤基质中释放抗癌药物的负载药物纳米胶束。

2.根据权利要求1所述的在肿瘤基质中释放抗癌药物的负载药物纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述取100mL苯甲醇，加入10mL浓硫酸搅拌混合，具体为：取100mL无水乙醚，边滴加边搅拌的加入10mL浓硫酸，滴加后冷却至室温，再加入100mL苯甲醇，充分搅拌后，旋蒸除去乙醚；加入所述天冬氨酸时，分成2-5等份分次加入。

3.根据权利要求1所述的在肿瘤基质中释放抗癌药物的负载药物纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述对滤饼清洗抽干，具体为：先用超纯水清洗滤饼2-5次，再用无水乙醚清洗滤饼2次，清洗后抽干，再放入300-500mL超纯水中，在70℃下搅拌溶解，待溶液成澄清状后，经热过滤，取滤液冷藏过夜。