[发明专利]无标记血管紧张素Ⅱ受体细胞模型构建和筛选方法及应用

权利要求书

1.一种无标记血管紧张素Ⅱ受体细胞模型构建和筛选方法，其特征在于：由内源性表达AT1受体的细胞作为载体，将该细胞置于光学生物传感器微孔板中进行培养，培养结束后将其放置于Epic仪器的信号检测位置，并在其中加入AT1受体激动剂或拮抗剂或待测化合物，对其进行实时响应信号的检测，获得实时响应信号，通过对实时响应信号的处理结果来表征和评判AT1受体配体的药理学特性，从而实现无标记AT1受体细胞模型构建和筛选。

2.如权利要求1所述的构建和筛选方法，其特征在于：以A549或Hep G2细胞为载体，通过光学生物传感器微孔板得到实时响应信号，通过对实时响应信号的处理来建立AT1受体模型；具体AT1受体模型由如下方法构建得到：

A.培养A549或Hep G2细胞；

B.收获步骤A所培养的A549或Hep G2细胞，接种到Epic光学生物传感器微孔板中，置于培养箱中培养；

C.吸弃步骤B微孔板中培养细胞的培养基，加入HBSS缓冲液，置于Epic仪器上平衡孵育至细胞状态稳定；

D.在Epic仪器的系统上建立基线，在微孔板内加入AT1受体激动剂或拮抗剂，继续监测细胞响应信号指定时间，记为步骤S1；

E.重新在Epic仪器的系统上建立基线，在微孔板里加入AT1受体激动剂继续监测到指定时间，记为步骤S2；

F.以S1中的探针分子剂量与本身S1的DMR信号或者S2中AT1受体激动剂引起DMR响应信号的对应关系，绘制量效关系曲线，计算激动剂或拮抗剂在AT1受体上的药理学参数，完成AT1受体模型在A549或Hep G2细胞系上的构建。

3.如权利要求1所述的构建和筛选方法，其特征在于：以A549或Hep G2细胞为载体，通过光学生物传感器微孔板得到实时响应信号，通过对实时响应信号的处理来建立AT1受体筛选系统；具体AT1受体筛选系统由如下方法构建得到：

A.培养A549或Hep G2细胞；

B.收获步骤A所培养的A549或Hep G2细胞，接种到Epic光学生物传感器微孔板中，置于培养箱中培养；

C.吸弃步骤B微孔板中培养细胞的培养基，加入HBSS缓冲液，置于Epic仪器上平衡孵育至细胞状态稳定；

D.在Epic仪器的系统上建立基线，在微孔板内加入待测化合物，继续监测细胞响应信号到指定时间，记为步骤S1；

E.重新在Epic仪器的系统上建立基线，在微孔板内加入所需浓度的AT1受体激动剂继续监测至指定时间，记为步骤S2；

F.以S1中待测化合物剂量与本身S1的DMR信号或者S2中AT1受体激动剂引起DMR响应信号的对应关系，绘制量效关系曲线，计算待测化合物的在AT1受体上的药理学参数。完成待测化合物在AT1受体模型上的筛选。

4.如权利要求2或3任一所述的构建和筛选方法，其特征在于：所用的AT1受体激动剂为下列之一：血管紧张素Ⅱ、DAA-I乙酸盐；所用的AT1受体拮抗剂为下列之一:阿奇沙坦，坎地沙坦，EMD 66684，伊普沙坦，EXP 3174，厄贝沙坦，洛沙坦，奥美沙坦酯，替米沙坦,缬沙坦和ZD 7155。

5.如权利要求2或3所述的构建和筛选方法，其特征在于：步骤S1所用的AT1受体激动剂浓度为0-1000nM。

6.如权利要求2或3任一所述的构建和筛选方法，其特征在于：步骤S2所用的AT1受体激动剂浓度为其在该细胞上获得的EC₅₀值～EC₁₀₀值,其中血管紧张素Ⅱ的所用浓度是4-160nM。

7.如权利要求2或3任一所述的构建和筛选方法,其特征在于:步骤S1的处理时间为0-120分钟；步骤S2的处理时间为3-120分钟。

8.如权利要求1所述的方法在筛选AT1受体或其信号转导途径中的激动剂或拮抗剂的应用。

9.如权利要求1所述的方法在检测AT1受体的配体与AT1受体的结合活性中的应用。