[发明专利]一种过氧化氢全细胞生物传感器及其制备与应用

说明书

本发明涉及一种过氧化氢全细胞生物传感器及其制备与应用。本发明首先构建pCM‑lux载体，再构建pCM‑lux‑PahpC质粒，再将构建好的pCM‑lux‑PahpC质粒转入恶臭假单胞菌Pseudomonas putida KT2440中，得到过氧化氢全细胞生物传感器KT2440OX。将KT2440OX菌株的菌液加入待测过氧化氢样品中，读取样品的相对发光强度，利用已知浓度的H₂O₂样品中加入KT2440OX菌株的菌液后的相对发光强度，建立H₂O₂浓度与相对发光强度之间的关系，再利用样品的相对发光强度计算样品中的H₂O₂浓度。与现有技术相比，本发明可建立科学、准确、快速检测过氧化氢含量的方法，特别适用于直接检测样品中残留的过氧化氢，为国家相关部门制定相应的检测标准，提供一些意见和帮助，是一个非常有前途的过氧化氢残留量的检测方法。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，尤其是涉及一种过氧化氢全细胞生物传感器及其制备与应用。

背景技术

过氧化氢(Hydrogen peroxide)，其水溶液也被称为双氧水，分子式为H₂O₂，纯品为无色液体，密度1.442g/cm³，熔点-0.41℃，沸点150.2℃。有爆炸性和腐蚀性，同时具有氧化性和还原性，纯品较为稳定，是一种强氧化剂，当含有微量杂质时，光照会催化它的分解，呈弱酸性，有氧化性和还原性(Tanner PA,Wong AYS.1998.Spectrophotometricdetermination of hydrogen peroxide in rainwater.Analytica Chimica Acta 370:279-287.)。在人们的日常生活中到处都可以看到过氧化氢的身影，它是一种性能优良的氧化剂、漂白剂、消毒剂和交联剂。过氧化氢是一种非常重要的化工原料，自1990年以来，其应用范围从最初纺织工业逐渐扩大到许多行业，如化工、电子产品、纺织品、食品等(陈迪航,李绵庆.2011.过氧化氢的应用领域与主要生产方法.化工技术与开发40:32-35.)。

过氧化氢作为一种十分重要的化工原料，世界各国对其生产研发都十分重视，90年代以后，应用范围从最初的纺织印染逐渐扩大。过氧化氢的高效杀菌、氧化漂白作用和易分解、低残留的特点促使很多食品生产企业超量或非法添加过氧化氢，用来杀灭食品、包装材料及设备容器中的微生物和增加食品的色悦感。过氧化氢由于具有高效杀菌、低残留、易分解、漂白效果好的特点，促使许多食品制造商和工业企业在食品生产、加工、包装材料中使用过氧化氢，用于杀灭生产设备、包装材料和食物中的有害微生物。然而，过量使用过氧化氢和非法添加工业过氧化氢的现象非常严重，从而导致食物中毒事件经常发生。如最近的新闻报道中个别不法商贩用非食品添加剂过氧化氢来加工鸡爪、泡制鲨鱼皮、泡制有毒猪浮皮、漂白开心果、泡蟹肉粒等等类似的食品安全事件。由于过氧化氢本身的性质和其他因素的影响，过氧化氢极不稳定，经食品加工后在食品中的残留量很低，现有的过氧化氢检测方法存在着灵敏度低、准确度差、不适于痕量检测等问题。因此建立一种高效、灵敏、快速检测食品中过氧化氢的检测技术，是食品安全的迫切需要解决的关键技术问题，对过氧化氢的测定方法研究和应用，具有重要的意义(孙佳.2014.食品中过氧化氢的检测方法研究吉林农业大学.)。