[发明专利]长裂苦苣菜生物碱四级分离物及其分离方法和应用

权利要求书

1.长裂苦苣菜生物碱四级分离物，其特征在于，所述四级分离物由包括以下步骤的方法制备得到：

（1）制备长裂苦苣菜提取物，所述长裂苦苣菜提取物由包括以下步骤的方法制备得到：

以75%乙醇为溶剂，将长裂苦苣菜制成液料比为30 mL/g的提取溶液，调节提取溶液的pH为5，进行超声提取，超声提取的功率为700 W，温度为55 ℃，超声时间为30 min，超声提取后，静置，取上清液，旋转蒸发后冷却干燥，即得；

（2）将步骤（1）得到的长裂苦苣菜提取物配制成100 mg/mL的供试液，采用制备色谱法进行分离，色谱条件如下：

采用C18硅胶柱，以0.1%甲酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，流速10 mL/min，柱温27 - 33℃，波长为255 -265 nm，梯度洗脱程序为：

在0 - 5min的时间范围内，流动相A的体积由95%变为60%，流动相B的体积由5%变为40%；

在5-15 min的时间范围内，流动相A的体积由60%变为30%，流动相B的体积由40%变为70%；

在15-30 min的时间范围内，流动相A的体积由30%变为20%，流动相B的体积由70%变为80%；

在30-35 min的时间范围内，流动相A的体积保持为20%，流动相B的体积保持为80%；

收集峰高范围在420-2000 mAU的馏分，得到初级分离物；

（3）将步骤（2）得到的初级分离物浓缩、干燥后，配制成10 mg/mL的供试液并采用制备色谱法分离，色谱条件如下：

采用C18硅胶柱，以0.1%甲酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，流速10 mL/min，柱温27 - 33℃，波长为255 -265 nm，梯度洗脱程序为：

在0 - 5min的时间范围内，流动相A的体积由95%变为60%，流动相B的体积由5%变为40%；

在5-15 min的时间范围内，流动相A的体积由60%变为30%，流动相B的体积由40%变为70%；

在15-30 min的时间范围内，流动相A的体积由30%变为20%，流动相B的体积由70%变为80%；

在30-35 min的时间范围内，流动相A的体积保持为20%，流动相B的体积保持为80%；

收集峰高范围在0.2-1.8 AU的馏分，得到次级分离物；

（4）将步骤（3）得到的次级分离物浓缩、干燥后，配制成10 mg/mL的供试液并采用制备色谱法分离，色谱条件如下：

采用C18硅胶柱，以0.1%甲酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，流速1 mL/min，柱温30℃，波长为260 nm，梯度洗脱程序为：

在0 - 8min的时间范围内，流动相A的体积由95%变为75%，流动相B的体积由5%变为25%；

在8-10 min的时间范围内，流动相A的体积由75%变为65%，流动相B的体积由25%变为35%；

在10-20 min的时间范围内，流动相A的体积由65%变为40%，流动相B的体积由35%变为60%；

在20-24 min的时间范围内，流动相A的体积由40%变为20%，流动相B的体积有60%变为80%；

在24 - 27 min的时间范围内，流动相A的体积保持为20%，流动相B的体积保持为80%，收集16 - 18 min的馏分，得到三级分离物；

（5）用HPLC法分离步骤（4）得到的三级分离物，色谱条件如下：

以0.1%甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，流速0.3 mL/min，柱温30℃，波长260nm，梯度洗脱程序为：

在0-10 min时间范围内，流动相B的体积由5%变为95%，流动相A的体积由95%变为5%，收集5.8 -6.2 min的馏分，得到四级分离物。

2.根据权利要求1所述的长裂苦苣菜生物碱四级分离物，其特征在于，步骤（2）中，柱温为30 ℃，波长为260 nm。