[发明专利]一种外源基因定点整合的打靶载体及其应用在审
申请号: | 201910727202.9 | 申请日: | 2019-08-07 |
公开(公告)号: | CN110564764A | 公开(公告)日: | 2019-12-13 |
发明(设计)人: | 李奎;阮进学;韩晓松;熊友才;庄荣志;裴杨莉;杨亚岚;周荣;于辉;张垒霞 | 申请(专利权)人: | 佛山科学技术学院 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85;C12N15/90 |
代理公司: | 44205 广州嘉权专利商标事务所有限公司 | 代理人: | 朱继超 |
地址: | 528000 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 打靶载体 同源臂 终止密码子 打靶序列 定点整合 构建 基因功能研究 外源基因序列 多克隆位点 血清蛋白质 制备转基因 种外源基因 肽编码序列 表达载体 低分子量 上游序列 外源基因 下游序列 转基因猪 剪切 表达量 恒定的 内源性 外显子 转外源 细胞 基因 | ||
1.一种外源基因定点整合的打靶载体,其特征在于,所述打靶载体是由表达载体的多克隆位点反向插入打靶序列而成,所述打靶序列从左到右依次为左侧同源臂序列、2A剪切肽编码序列、外源基因和右侧同源臂序列,所述的左侧同源臂序列为猪B2M基因终止密码子的上游序列,所述右侧同源臂序列为猪B2M基因终止密码子的下游序列,所述猪B2M基因终止密码子位于猪B2M基因第3外显子上。
2.根据权利要求书1中所述的外源基因定点整合的打靶载体,其特征在于,左侧同源臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求书1中所述的外源基因定点整合的打靶载体,其特征在于,所述2A剪切肽编码序列为编码P2A剪切肽的核苷酸序列,如SEQ ID NO.2所示。
4.根据权利要求书1中所述的外源基因定点整合的打靶载体,其特征在于,右侧同源臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
5.根据权利要求书1中所述的外源基因定点整合的打靶载体,其特征在于,表达载体为真核表达载体或克隆载体。
6.根据权利要求书5中所述的外源基因定点整合的打靶载体,其特征在于,所述真核表达载体为Pcdna3.1(+)。
7.根据权利要求书1中所述的外源基因定点整合的打靶载体,其特征在于,所述打靶序列插入的位点为HindIII与Kpn1位点之间。
8.根据权利要求书1中所述的外源基因定点整合的打靶载体,其特征在于,用于靶向猪B2M基因终止密码子的sgRNA序列为SEQ ID NO.4。
9.如权利要求书1-8任意一项所述的外源基因定点整合的打靶载体在获得定点敲入外源基因的细胞系或转基因猪上的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于佛山科学技术学院,未经佛山科学技术学院许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910727202.9/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 一种基因打靶用中间载体及其制备方法和用途
- 一种基于禽类腺相关病毒的基因打靶载体及其构建方法
- 一种基因打靶系统
- 一种基于TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体及重组细胞
- 靶向打靶载体及靶向整合外源基因至MYH9 Intron2位点构建小鼠胚胎干细胞株的方法和应用
- 一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统
- HTT的CRISPR/Cas9-gRNA打靶序列对、质粒及HD细胞模型
- 外源基因定点整合至ACTB基因下游的打靶载体构建方法及其应用
- LILRA3基因敲入小鼠的打靶载体和LILRA3基因敲入小鼠的构建方法
- 打靶载体及整合外源基因至小鼠DC-SIGN外显子7位点构建BAC克隆的方法和应用