[发明专利]鸭3型腺病毒与鸭新型呼肠孤病毒鉴别诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于鉴别鸭3型腺病毒与鸭新型呼肠孤病毒的特异性引物，包括用于检测鸭3型腺病毒的检测引物DAdV3‑1/DAdV3‑2，和用于检测鸭新型呼肠孤病毒的检测引物NDRV‑7/NDRV‑8，如SEQ ID NO.1‑4所示。一种鸭3型腺病毒与鸭新型呼肠孤病毒鉴别诊断试剂盒，包括上述特异性引物，以及阳性质粒。一种鉴别鸭3型腺病毒与鸭新型呼肠孤病毒的方法：提取待测样品的基因组，利用特异性引物进行扩增，对扩增产物进行电泳并观察有无扩增条带，从而作出判断。本发明对两种病毒核酸的最低检出量均低于10pg，且对其他常见鸭病毒均检不出，具有敏感性高、特异性好等优点。

技术领域

本发明涉及一种鸭3型腺病毒与鸭新型呼肠孤病毒鉴别诊断试剂盒，属于生物检测技术领域。

背景技术

鸭腺病毒(Duck adenovirus，DAdV)目前有1型、2型和3型三种不同的流行株。1型鸭腺病毒，又称为产蛋下降综合征病毒，于1976年首次发生在荷兰，主要引起蛋鸡产蛋下降，鸭群感染主要表现为呼吸道症状；2型鸭腺病毒首次报道于法国，主要感染番鸭，临床表现为消瘦、跛行；3型鸭腺病毒(DAdV3)2014年开始发生于我国南方地区，主要感染番鸭，临床表现为消瘦、跛行，剖检肝脏肿胀、坏死、发白，脾脏坏死，多发于2-3周龄的番鸭。鸭新型呼肠孤病毒(Novel duck reovirus，NDRV)感染是近几年发生的一种严重危害我国养鸭业的新型疾病。该病可感染番鸭、樱桃谷鸭、麻鸭等不同品种的鸭，以2周龄内的雏鸭感染最为常见，也最为严重，容易继发细菌感染，死亡率可达20％。病鸭主要表现为生长发育迟缓、蹲窝、跛行等，剖检以肝脾坏死为主。

鸭3型腺病毒与鸭新型呼肠孤病毒均可感染番鸭，是生产中常见的鸭病，两者在发病日龄、临床症状、剖检病变等方面较为相似，临床上较难区分，给这两种疾病的防治带来了很大困难。因此生产中迫切需要一种快速鉴别这两种疾病的方法，以提高疾病治疗的针对性。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种鸭3型腺病毒与鸭新型呼肠孤病毒鉴别诊断试剂盒，以快速鉴别这两种病毒。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种用于鉴别鸭3型腺病毒与鸭新型呼肠孤病毒的特异性引物，包括用于检测鸭3型腺病毒的检测引物DAdV3-1/DAdV3-2，和用于检测鸭新型呼肠孤病毒的检测引物NDRV-7/NDRV-8；所述检测引物DAdV3-1/DAdV3-2的核苷酸序列如下所示，如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示，其扩增片段大小为516bp；

DAdV3-1：5'-TTCTTCAGGCGCTATGTCTG-3'(SEQ ID NO.1)；

DAdV3-2：5'-ATGGAAGCCTTGTCAAGCC-3'(SEQ ID NO.2)。

所述检测引物NDRV-7/NDRV-8核苷酸序列如下所示，如SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4所示，其扩增片段大小为196bp；

NDRV-7：5'-ATGTCGCTGTCACGGGTAA-3'(SEQ ID NO.3)；

NDRV-8：5'-TGGTAGGAACCACGCTCAA-3'(SEQ ID NO.4)。

所述特异性引物在制备鸭3型腺病毒与鸭新型呼肠孤病毒鉴别诊断试剂盒中的应用。

一种鸭3型腺病毒与鸭新型呼肠孤病毒鉴别诊断试剂盒，包括上述用于鉴别鸭3型腺病毒与鸭新型呼肠孤病毒的特异性引物，以及阳性质粒，还包括PCR反应所必需的试剂；所述阳性质粒为重组质粒T-DAdV3和T-NDRV。