[发明专利]一种牛支原体灭活疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种牛支原体灭活疫苗，其特征在于，所述牛支原体灭活疫苗包括灭活的牛支原体和疫苗佐剂；

其中，所述牛支原体为牛支原体（Mycoplasma bovis）16M株，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏日期为2019年4月4日，保藏号为CCTCC NO: M2019235；

所述疫苗佐剂包括206佐剂和CpG免疫增强剂；

所述牛支原体灭活疫苗的制备方法包括：将牛支原体（Mycoplasma bovis）16M株灭活后，加入终浓度为300微克/mL CpG免疫增强剂混匀后再加入206佐剂；

所述牛支原体（Mycoplasma bovis）16M株灭活具体方法：将牛支原体（Mycoplasmabovis）16M接种至改良Thiaucourt's培养基中培养后传代培养；加入二乙烯亚胺灭活，得灭活牛支原体（Mycoplasma bovis）16M株培养物；

所述牛支原体灭活疫苗每头份剂量中包含4.0×10¹⁰CCU的灭活牛支原体（Mycoplasma bovis）16M株；

所述牛支原体灭活疫苗为肌注型疫苗；

每头份剂量牛支原体灭活疫苗为2mL。

2.权利要求1所述牛支原体灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将牛支原体（Mycoplasma bovis）16M株灭活后，加入终浓度为300微克/mL CpG免疫增强剂混匀后再加入206佐剂；

所述牛支原体（Mycoplasma bovis）16M株灭活具体方法包括：将牛支原体（Mycoplasmabovis）16M接种至改良Thiaucourt's培养基中培养后传代培养；加入二乙烯亚胺灭活，得灭活牛支原体（Mycoplasma bovis）16M株培养物。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述二乙烯亚胺终浓度为0.5-1.5%，灭活温度为35-40℃，灭活时间为20-40小时。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述二乙烯亚胺终浓度为1.5%，灭活温度为37℃，灭活时间为24小时；

二乙烯亚胺灭活后加入无菌硫代硫酸钠，中和并终止灭活；

将终止灭活后的牛支原体培养物离心收集菌体，PBS清洗，重悬后备用。

5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，每头份牛支原体灭活疫苗包含4.0×10¹⁰CCU的灭活牛支原体（Mycoplasma bovis）16M株。

6.权利要求1所述牛支原体灭活疫苗在制备预防和/或治疗牛支原体感染引起的疾病的药物中的应用。