[发明专利]一种牛支原体灭活疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种牛支原体灭活疫苗及其制备方法和应用，属于微生物和生物制品技术领域。所述牛支原体灭活疫苗至少包括灭活的牛支原体(Mycoplasma bovis)16M株及疫苗佐剂。本发明从牛支原体灭活疫苗的制备的BEI灭活条件、牛支原体灭活疫苗的免疫方式和牛支原体灭活疫苗使用的佐剂及临床应用上进行探究，探寻出了最佳的牛支原体BEI灭活条件、牛支原体灭活疫苗的免疫方式和免疫佐剂，从而成功制备一种牛支原体灭活疫苗，该牛支原体灭活疫苗在临床应用中显示出良好的保护效果，具有良好的应用推广价值。

技术领域

本发明属于微生物和生物制品技术领域，具体涉及一种牛支原体灭活疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

牛支原体(Mycoplasma bovis)是引起牛呼吸道炎症、乳腺炎和关节炎等多种症状的重要病原体之一。自1961年，Hale等人首次从美国乳汁中分离得到牛支原体后，世界各地陆续分离到牛支原体。2008年，我国首次在肉牛中暴发牛支原体肺炎疫情，此后相继在湖北、贵州、宁夏、内蒙古、广西、重庆等地区的转运犊牛中发现该病，发病率为50％～100％，病死率高达10％-50％，给我国养牛业造成了巨大的经济损失。

一般而言，难以治疗牛支原体感染的原因在于它们缺乏细胞壁，这使得多数常用的广谱抗生素对它们无效。而且牛支原体的免疫机制非常复杂且特殊，至今尚未完全清楚。研究表明牛支原体与宿主免疫细胞相互作用能产生两种现象：免疫增强和免疫抑制。由于牛支原体基因的DNA高频率重组，表面脂蛋白具有高度的特异性，这就使牛支原体表型多变，也使得国内外有关疫苗的研究进程缓慢，只有美国将商品化的牛支原体疫苗投放市场。美国虽有两种商品化疫苗，但是在2011年，对这两种疫苗进行的犊牛免疫保护试验表明，两种疫苗中一种可以明显提高抗体水平，但是对牛的保护率约44％，而另一种疫苗的免疫效果不显著。因此目前，国内外市场上急需一种有效的商品化牛支原体疫苗，以控制牛支原体的流行和危害，提高犊牛和转运牛只成活率。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供一种牛支原体灭活疫苗及其制备方法和应用。本发明通过优化筛选疫苗制备条件，从而成功制备一种牛支原体灭活疫苗，该牛支原体灭活疫苗在临床应用中显示出良好的保护效果，极具市场推广应用之价值。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明的第一个方面，提供一种牛支原体灭活疫苗，所述牛支原体灭活疫苗至少包括灭活的牛支原体及疫苗佐剂。

其中，所述牛支原体为牛支原体(Mycoplasma bovis)16M株，保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学)，保藏日期为2019年4月4日，保藏号为CCTCC NO:M2019235。

进一步的，所述疫苗佐剂至少包括206佐剂和CpG免疫增强剂。

本发明的第二个方面，提供上述牛支原体灭活疫苗的制备方法，所述方法至少包括：将牛支原体(Mycoplasma bovis)16M株灭活后，加入CpG免疫增强剂混匀后再加入206佐剂。

其中，所述牛支原体(Mycoplasma bovis)16M株灭活具体方法包括：将牛支原体(Mycoplasma bovis)16M接种至改良Thiaucourt's培养基中培养后传代培养；加入二乙烯亚胺(BEI)灭活，得灭活牛支原体(Mycoplasma bovis)16M株培养物。

本发明的第三个方面，提供上述牛支原体灭活疫苗在制备预防和/或治疗牛支原体感染引起的疾病的药物中的应用。