[发明专利]一种检测GP5基因5’端甲基化的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种检测GP5基因5’端甲基化的试剂盒，其特征在于，包括人GP5基因5’端甲基化特异性扩增反应液和侧向流核酸检测试纸；所述GP5基因5’端甲基化特异性扩增反应液包括甲基化DNA处理组分、GP5基因5’端甲基化特异性引物组、热稳定性DNA聚合酶、UNG酶和反应缓冲液，所述侧向流核酸检测试纸包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜检测区和吸水垫；所述GP5基因5’端甲基化特异性引物组包括上游GP5基因5’端甲基化特异性识别引物、上游通用扩增引物和下游基因特异性引物；所述上游GP5基因5’端甲基化特异性识别引物含有GCACATCCTGCTCTT的序列；且该序列的5’端连有接头引物，该序列的3’端有修饰基团；所述上游通用扩增引物序列为：TTCCAAGCCTTCGCCACCTCCATC，所述下游基因特异性引物序列为：GCCGCGGCCCATTCCG；所述上游GP5基因5’端甲基化特异性识别引物5’端接头引物为一“发卡结构”接头，所述接头序列为GTCGTATCCAGTGCTTCCAAGCCTTCGCCACCTCCATCGCACTGGATACGAC，所述特异性引物识别序列3’端修饰为LNA、磷酸化修饰、ddC或C3 Spacer中的任意一种。

2.根据权利要求1所述的检测GP5基因5’端甲基化的试剂盒，其特征在于，所述甲基化DNA处理组分为亚硫酸盐溶液或甲基化依赖性的限制内切酶；所述亚硫酸盐溶液包括3-5M亚硫酸氢钠、5%-10%乙二醇二甲醚和5-10mM氢醌；所述甲基化依赖性的限制内切酶为MteI、LpnPI、BlsI、GlaI、PcsI、KroI中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的检测GP5基因5’端甲基化的试剂盒，其特征在于，所述上游通用扩增引物的5′端标记地高辛、FITC、HEX、FAM或Cy5中的任意一种，所述下游基因特异性引物的5′端标记生物素。

4.根据权利要求1所述的检测GP5基因5’端甲基化的试剂盒，其特征在于，所述结合垫喷涂有修饰的纳米彩色乳胶微球，所述修饰为链酶亲和素。

5.根据权利要求1所述的检测GP5基因5’端甲基化的试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜检测区包括一条C线和两条T线。

6.根据权利要求5所述的检测GP5基因5’端甲基化的试剂盒，其特征在于，所述C线包被的是生物素-BSA，所述两条T线分别包被的是地高辛抗体、FITC抗体、HEX抗体、FAM抗体、Cy5抗体中的任意一种，且两条T线包被的抗体不同。