[发明专利]基因甲基化检测的试剂、方法和试剂盒

说明书

本发明公开了一种基因甲基化检测的试剂、方法和试剂盒，涉及基因检测技术领域。本发明公开的基因甲基化检测的试剂，包括第一核酸分子和第二核酸分子，其中，第一核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，第二核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。该试剂针对septin9基因启动子区第三个CpG岛处的甲基化情况进行检测，采用该试剂进行检测septin9基因的甲基化情况，其特异性更强、灵敏度更高。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体而言，涉及基因甲基化检测的试剂、方法和试剂盒。

背景技术

近年来，表观遗传学机制受到研究者们的广泛关注，其中的DNA异常甲基化是肿瘤常见的表观遗传学改变，在众多研究中发现DNA甲基化导致基因表达异常是引发肿瘤发生、发展的重要机制。septin9基因是septin家族中的一员，定位于染色体17q25.3，该染色体区段是散发性卵巢癌和乳腺癌的常见杂合性丢失部位，在子细胞的胞质分裂过程中起着至关重要的作用。研究报道，septin9基因甲基化在CRC早期筛查中的敏感性和特异性总体优势均较其他单一基因高，并且该基因研究比较成熟，作为早期CRC的分子标记物，已提交给FDA(美国食品与药品监督管理局)应用于临床。但是研究发现，单一基因甲基化检测筛查CRC时的敏感性和特异性仍不够理想。

公开号为CN108048566A的中国专利申请公开了一种检测septin9基因甲基化的核酸组合及试剂盒，然而经前期论证发现其引物的特异性存在一定缺陷，偶有非特异性扩增的情况出现。同时检测灵敏度相对较低。上述情况产生的主要原因是设计的引物结合位点不佳，导致引物与非甲基化模板也能部分结合。另外还有可能是引物和探针的退火温度并非最佳温度，从而导致非特异性扩增的情况产生。

本发明为避免上述情况发生，前期进行了大量的实验探索，从而使得设计的引物探针具有十分相近的退火温度，而且设计的引物探针结合位点对非甲基化模板没有结合的几率。同时通过对检测试剂的进一步优化，还可以极大地提高检测灵敏度，使其得到的检测结果更准确。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基因甲基化检测的试剂。该试剂针对septin9基因启动子区第三个CpG岛处的甲基化情况进行检测，采用该试剂检测septin9基因的甲基化情况，其特异性更强、灵敏度更高。

本发明的另一目的在于提供一种检测基因甲基化检测的方法。该方法可以针对septin9基因启动子区第三个CpG岛处的甲基化情况进行检测，采用该方法检测septin9基因的甲基化情况，其特异性更强、灵敏度更高。

本发明的另一目的在于提供一种基因甲基化检测的试剂盒。该试剂盒可以针对septin9基因启动子区第三个CpG岛处的甲基化情况进行检测，采用该试剂盒检测septin9基因的甲基化情况，其特异性更强、灵敏度更高以及具有更佳的稳定性。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供了一种基因甲基化检测的试剂，上述基因为septin9基因，上述试剂包括第一核酸分子和第二核酸分子，其中，上述第一核酸分子的核苷酸序列如SEQID NO.10所示，上述第二核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。

第一核酸分子为正向引物，其核苷酸序列(5’-3’)如下：

TTTTTCGCGCGATTCGTTG(SEQ ID NO.10)。

第二核苷酸分子为反向引物，其核苷酸序列(5’-3’)如下：

CGAAATAATCCCATCCAACT(SEQ ID NO.13)。

本发明提供的第一核酸分子和第二核酸分子通过对septin9基因启动子区第三个CpG岛处的序列进行科学设计，有效提高了检测的特异性和灵敏度。