[发明专利]一种可快速检测桑树青枯类病害的引物组、试剂、试剂盒及应用有效
| 申请号： | 201910732504.5 | 申请日： | 2019-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN110564875B | 公开（公告）日： | 2023-08-18 |
| 发明（设计）人： | 张雯龙;谢玲;岑贞陆;覃丽萍 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 广西中知华誉知识产权代理有限公司 45140 | 代理人： | 牙斐颖 |
| 地址： | 530007 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 检测 桑树 青枯类 病害 引物 试剂 试剂盒 应用 | ||
1.一种检测或辅助检测桑树青枯类病害的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)用引物组对待测桑树样品进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
(2)检测所述PCR扩增产物的大小；
若所述PCR扩增产物大小为678bp的片段，则桑树青枯类病害的感染病原是肠杆菌属(Enterobacterspp.)；
若所述PCR扩增产物大小为287bp的片段，则桑树青枯类病害的感染病原是拉尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)；
若PCR扩增产物有两条带，为678bp和287bp片段，则说明样品为肠杆菌属(Enterobacter spp.)和拉尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)两种病原菌复合侵染；
若PCR扩增产物没有扩增产物，说明样品中不含病原菌；
所述引物组包含引物对1和引物对2；所述引物对1的上游引物为SEQ ID No.1；下游引物为SEQ ID No.2；所述引物对2的上游引物为SEQ ID No.3；下游引物为SEQ ID No.4；
所述PCR扩增反应的体系为：PCRMastermix试剂12.5ul；10μmol/l的引物对1正向引物1ul；10μmol/l的引物对1反向引物1ul；10μmol/l的引物对2正向引物1ul；10μmol/l的引物对2反向引物1ul；模板DNA1ul；ddH2O7.5ul；
所述PCR扩增反应程序为：96℃预变性2min；94℃变性20s，68℃退火20s，72℃延伸30sec，总共35个循环；最后72℃延伸10min，10℃终止反应。
2.根据权利要求1所述的方法在检测或辅助检测桑树青枯类病害病原菌是拉尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)和/或肠杆菌属(Enterobacterspp.)中的应用。
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