[发明专利]一种可快速检测桑树青枯类病害的引物组、试剂、试剂盒及应用

说明书

本发明涉及基因试剂盒检测技术领域，特别涉及一种可快速检测桑树青枯类病害的PCR引物组、试剂、试剂盒及应用，本发明针对广西桑树青枯类病害由拉尔氏菌和肠杆菌两种病原菌单独或复合侵染的特点，选用和设计这两种病原菌的PCR特异性引物，制备特异的检测试剂盒，该试剂盒能同时、快速有效地检测出桑树青枯类病害的两种病原菌，可为该类病害的诊断、监测、种质选育及防治提供了有效手段。

【技术领域】

本发明涉及基因试剂盒检测技术领域，特别涉及一种可快速检测桑树青枯类病害的引物组、试剂、试剂盒及应用。

【背景技术】

蚕桑业是广西优势农业产业之一。桑是桑蚕生产的基础，桑叶的正常产量和质量是确保蚕桑业持续、稳定发展的重要保障之一。桑树青枯类病害是广西桑园常见的毁灭性细菌性病害，具有发病急、蔓延快和死亡率高等特点，有“桑瘟”之称，是国内桑树病害的主要检疫对象之一。发明人通过连续3年对广西桑树青枯类病害的发生情况进行全面的调查研究，发现广西的桑树青枯类病害由拉尔氏菌(Ralstonia solanacearum)和肠杆菌属(Eenterbacter spp.)两类细菌引起，这为病害的防控技术研究提供了基础。由于这两种病原菌均能侵染桑树根部导管和茎部维管束，影响水分运输，叶片出现萎凋，地上部的症状均表现为青枯，剖开根和茎部皮层可见木质部褐变，这两种病原菌在生产上的危害症状非常相似，肉眼难以区分，因此业内统称为桑树青枯类病害。

由于桑树青枯类病害为土传病害，采用农药防治该病存在很大难度，其中加强桑树苗木检疫是对该类病害进行综合治理的有效策略之一，已有研究表明，该类病害的病原菌可随土壤、水和带菌的植物繁殖材料在国内或国际间传播，其中植物繁殖材料是病原菌远距离传播的主要方式。从国家农业产业结构调整和广西优势农业产业发展的情况来看，广西桑园的面积还会不断扩大，还需要调运很多桑树苗木，广西已有部分地区发生了该类病害，要控制其进一步的扩散蔓延，就必须严格实行检疫措施，把带病菌的苗木堵在保护区之外，才能确保蚕业生产的安全，因此在病害诊断和检疫上均急需建立一套快速检测的体系。虽然目前有各种多重PCR体系用于检测病原菌，但是，还没有明确可同步检测桑青枯类病害病原菌的研究，这是因为在多重PCR反应中反应引物和反应体系是很难摸索的。

【发明内容】

鉴于上述内容，在探明广西桑青枯类病害病原菌种类的研究基础上，建立基于PCR的快速检测技术，获得高灵敏度、特异性强和结果稳定的快速检测体系可为桑树健康种苗的生产和引进、抗病育种提供有效的监控手段。对最终指导桑园青枯类病害的综合治理，减少损失，保证蚕茧产量和质量，促进蚕桑业的可持续发展具有深远的意义。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种检测或辅助检测桑树青枯类病的引物组，所述引物组包含引物对1和引物对2；所述引物组包含引物对1和引物对2；所述引物对1的上游引物为SEQ ID No.1；下游引物为SEQ ID No.2；所述引物对2的上游引物为SEQ ID No.3；下游引物为SEQ ID No.4。

为解决上述技术问题，本发明还提供了一种检测或辅助检测桑树青枯类病害的PCR试剂。

本发明提供的检测或辅助检测桑树青枯类病害的PCR试剂包括上述引物组。

本发明的PCR试剂所述引物对1和引物对2在PCR试剂中的终浓度等量，均为10μmol/l。

本发明还提供了一种检测或辅助检测桑树青枯类病害的试剂盒。

为解决上述问题，本发明的试剂盒包括上述的引物组和/或上述PCR试剂。

上述引物组或上述PCR试剂或上述试剂盒在检测或辅助检测桑树青枯类病害侵染病原是拉尔氏菌(Ralstonia solanacearum)和/或肠杆菌属(Eenterbacter spp.)中的应用。

本发明还提供一种检测或辅助检测桑树青枯类病害的方法，所述方法包括如下步骤：