[发明专利]用于快速检测目标生物或目的基因的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于快速检测目标生物或目的基因的试剂盒。本发明提供了检测幽门螺杆菌的试剂盒，包括HP引物组、H48引物对、H1引物对和胶体金检测试纸；HP引物组的引物依次如序列3至10所示；H48引物对的引物分别如序列11和12所示；H1引物对的引物分别如序列1和2所示。每个引物对的两条引物均在5’末端具有标记物(标记物甲和标记物乙)；胶体金检测试纸中包括胶体金垫和检测垫；胶体金垫上具有胶体金标记的结合物甲，检测垫的T线上具有结合物乙；标记物甲和结合物甲特异性结合；标记物乙和结合物乙特异性结合。本发明对我国诊断试剂行业的整体发展具有非常重要的意义，还有利于降低我国居民胃癌的发生率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于快速检测目标生物或目的基因的试剂盒，更具体涉及一种快速检测幽门螺杆菌的试剂盒，更具体涉及一种基于多重PCR和胶体金试纸条的用于快速检测幽门螺杆菌的试剂盒。

背景技术

基因是遗传的基本单元，携带有遗传信息的DNA或RNA序列，通过复制，把遗传信息传递给下一代，指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息，从而控制生物个体的性状表达。基因检测是通过血液、其他体液或细胞对DNA进行检测的技术，是取被检测者外周静脉血或其他组织细胞，扩增其基因信息后，通过特定设备对被检测者细胞中的DNA分子信息作检测，分析它所含有的基因类型和基因缺陷及其表达功能是否正常的一种方法，从而使人们能了解自己的基因信息，明确病因或预知身体患某种疾病的风险。

幽门螺杆菌(H.Pylori)是世界上最常见的病原体之一。流行病学研究表明幽门螺杆菌感染了世界范围内一半以上的人口。幽门螺杆菌在我国人群中的感染率高达60％，其中城市为50％，农村为68.8％，每年新感染病例超过1200万人。幽门螺杆菌是引起消化性溃疡和慢性活动性胃炎的主要病因，也是世界卫生组织于2012年认定其为胃癌第一类致癌原。及时地诊断并根除幽门螺杆菌是治愈胃病的前提。

目前幽门螺杆菌的检查方法主要包括：细菌的直接检查、尿素酶检查、免疫学检测、聚合酶链反应技术等。现有幽门螺杆菌的检查方法的不足之处如下：

(1)细菌的直接检查。通过胃镜检查钳取胃粘膜(多为胃窦粘膜)作直接涂片、染色，组织切片染色及细菌培养来检测幽门螺杆菌。缺点：直接涂片、染色，组织切片染色受检测者的经验、细菌的状态、取材的部位影响较大，并且幽门螺杆菌的培养非常缓慢、费时。

(2)尿素酶检查。因为幽门螺杆菌能够产生尿素酶，故可通过检测尿素酶来诊断幽门螺杆菌感染。尿素酶分解胃内尿素生成氨和二氧化碳，使尿素浓度降低、氨浓度升高。基于此原理已发展了多种检测方法：胃活检组织尿素酶试验、呼吸试验、胃液尿素或尿素氮测定、15N-尿素试验。缺点：受到其他能产生尿素酶菌的干扰，检测前病人服用抗酸药物等会影响检测结果。

(3)免疫学检测。免疫学检测方法是通过测定血清，或粪便中的幽门螺杆菌抗体来检测幽门螺杆菌感染。缺点：一般感染幽门螺杆菌一段时间才呈抗体阳性，幽门螺杆菌感染初期检测结果常常会出现假阴性，从而使患者失去治疗的最佳时机；此外，由于幽门螺杆菌即使被根除，但该抗体下降缓慢，患者往往需要1-2年才能转阴，不利于判断治疗结果。

(4)聚合酶链反应技术。胃镜下采样后可采用聚合酶链反应(PCR)检测，这种方法灵敏度较高，结果也比较可靠。缺点：一方面，幽门螺杆菌的DNA突变性非常高，存在大量的变异，具有高度不一致性，单一引物PCR常常不能检测到DNA突变的菌种，很容易造成假阴性的结果；另一方面，只用一对PCR引物会有很高的概率与其他菌种或生物体的DNA片段具有同源性，而导致假阳性结果(例如目前常用的16S亚基序列虽具有保守性比较高的优点，但是它的特异性相对较低，因为所有的细菌核糖体中均有16S亚基序列，虽然在胃酸这一强腐蚀性的液体中能存活的细菌大多为幽门螺杆菌，但是在取样和DNA提取的过程中若发生细菌污染，则会影响检测结果，造成假阳性)。