[发明专利]用于检测前列腺腺体基底膜完整性的试剂盒及其应用

权利要求书

1.用于检测前列腺腺体基底膜完整性的试剂盒，其特征在于，包括枸橼酸盐、非免疫动物血清封闭液、兔源性抗TRIB1单克隆抗体、第二抗体和二氨基联苯胺显色剂，其中，第二抗体靶向结合兔源性抗TRIB1单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中各组分的用量分别为：

所述枸橼酸盐为粉剂，所述兔源性抗TRIB1单克隆抗体的稀释倍数为1:100。

3.权利要求1或2所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)准备超纯水，将枸橼酸盐充分溶解，配置成10mmol/L的枸橼酸盐溶液；

2)另外准备超纯水，加入30％(W/W)H₂O₂；准备1×TBST溶液1L；

3)将待测病理切片用二甲苯清洗；

4)将切片用100％酒精清洗；

5)将切片用95％酒精清洗；

6)将切片用超纯水清洗；

7)将切片放置枸橼酸盐溶液内微波炉煮沸5～10分钟，始终保持切片在枸橼酸盐溶液内；

8)将切片用超纯水清洗；

9)将切片浸泡在3％(W/W)的H₂O₂内；

10)将切片用超纯水清洗；

11)将切片用TBST清洗；

12)每张切片加100ul的非免疫动物血清，室温下孵育；

13)移去非免疫动物血清，每张切片加100ul的稀释后的第一抗体，4℃孵育过夜；

14)将切片移到室温，复温10分钟；用TBST清洗；

15)每张切片加50ul免疫组化加强检测试剂，室温孵育；

16)用TBST清洗切片；

17)加30ul的DAB浓缩液至1ml DAB稀释液，混匀；

18)每张切片加200ul的DAB混合液，染色，染色时间由肉眼或显微镜下观察，染色明显即可终止；

19)用超纯水清洗切片；

20)将切片在95％的酒精中浸泡；

21)将切片在100％的酒精中浸泡；

22)用中性树胶将组织用盖玻片封片，待中性树胶干燥后科在纤维镜下观察；

23)免疫组织化学检测结果判断结果判定标准：Leica荧光显微镜下，每张切片随机选取五个高倍镜视野观察细胞，基底细胞细胞核膜出现棕黄或棕褐色颗粒为阳性细胞，观察基底细胞是否连续用于判断前列腺腺体是否完整，肿瘤是否侵犯到间质；

根据阳性细胞染色强度以及阳性细胞在总细胞中所占数量比例判定实验结果；按染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；

然后按阳性细胞率评分：肿瘤细胞内无阳性染色者为0分，阳性细胞率≤10％为1分，11％～50％为2分，51％～75％为3分，＞75％为4分，两者积分的乘积作为染色结果的评判标准：0定为-，阴性；1～4分为+，弱阳性；5～8分为++，阳性；9～12分为+++，强阳性。

4.权利要求1或2所述的试剂盒在制备前列腺癌病理辅助诊断剂中的应用。

5.权利要求1或2所述的试剂盒在制备预测前列腺癌生化复发的试剂中的应用。