[发明专利]用于检测前列腺腺体基底膜完整性的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测前列腺腺体基底膜完整性的试剂盒及其使用方法和应用，试剂盒包括枸橼酸盐、非免疫动物血清封闭液、兔源性抗TRIB1单克隆抗体、第二抗体和二氨基联苯胺显色剂，其中，第二抗体靶向结合兔源性抗TRIB1单克隆抗体采用本发明提供的试剂盒，能够准确地检测出人体前列腺组织TRIB1的表达位置及水平，根据TRIB1的表达位置能判断前列腺癌的侵犯情况，根据TRIB1的表达量能有效的判断肿瘤免疫抑制状态，进而预测前列腺癌是否会生化复发以及发展进程。

技术领域

本发明涉及前列腺癌病理辅助诊断技术领域，尤其是一种用于检测前列腺腺体基底膜完整性的试剂盒及其应用。

背景技术

中国前列腺癌的发病率近十年来增速明显，这与人口老龄化密切相关。根据美国癌症协会的报告，前列腺癌目前是欧美老年男性的“头号杀手”。不同国家的前列腺癌的发病率存在较大差异。美国的前列腺癌发病率已经超越肺癌，成为发病率最高的男性恶性肿瘤。但近年来呈明显的上升趋势。

人类TRIB1蛋白，也被称为C8FW、GIG2、TRB1和SKIP1，编码基因位于染色体8q24.13。TRIB1在多种组织中都有表达，包括骨骼肌、胰腺、甲状腺、骨髓、外周血单核细胞和脂肪组织。TRIB1能够调控细胞内的NFKB信号通路，从而影响细胞外分泌的细胞因子，如IL8，CXCL1，CXCL2等，这些细胞因子能调节肿瘤微环境中的巨噬细胞，促进单核/巨噬细胞向II型巨噬细胞转化。从而出现肿瘤免疫抑制，诱导肿瘤细胞免疫逃逸。

在人的前列腺组织中，TRIB1能稳定的表达在基底细胞的细胞核膜上，对于病理判断前列腺腺体基底细胞膜是否完整提供可靠的依据，同时，TRIB1能稳定的显示基底细胞来源的肿瘤干细胞，良好的显示肿瘤侵袭范围。不仅如此，在临床数据分析发现，TRIB1蛋白高密度表达能有效预测前列腺癌的生化复发。

当前对前列腺癌的治疗以抗雄激素及手术切除治疗为主，以及术前前列腺穿刺得到前列腺组织样本，依据格利森(Gleason)评分来进行前列腺癌病理分级。病理诊断前列腺癌中，前列腺癌的基底细胞状态非常重要。在基底细胞向肿瘤干细胞转化过程中，目前临床诊断用的基底细胞分子如P53等都会消失，不利于观察基底细胞来源的肿瘤干细胞生长情况，因此难以准确地预测前列腺癌是否会生化复发以及发展进程。

发明内容

基于上述问题，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种用于检测前列腺腺体基底膜完整性的试剂盒，以其检测结果为基础，能够准确地预测前列腺癌是否会生化复发以及发展进程。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案包括以下几个方面：

在第一个方面，用于检测前列腺腺体基底膜完整性的试剂盒，包括枸橼酸盐、非免疫动物血清封闭液、兔源性抗TRIB1单克隆抗体、第二抗体和二氨基联苯胺显色剂，其中，第二抗体靶向结合兔源性抗TRIB1单克隆抗体。

优选地，所述试剂盒中各组分的用量分别为：

所述枸橼酸盐为粉剂，所述兔源性抗TRIB1单克隆抗体的稀释倍数为1:100。需要说明的是，上述用量为100人次的检测用量，根据需要还可以调整为10次、30次、50次、80次、120次、200次等或者更多次用量。

在第二个方面，本发明提供了上述试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

1)准备超纯水，将枸橼酸盐充分溶解，配置成10mmol/L的枸橼酸盐溶液；

2)另外准备超纯水，加入30％(W/W)H₂O₂；准备1×TBST溶液1L；

3)将待测病理切片用二甲苯清洗；

4)将切片用100％酒精清洗；

5)将切片用95％酒精清洗；