[发明专利]适配体功能材料及其制备方法和在OTA检测的应用

说明书

本发明属于霉菌毒素检测技术领域，具体涉及一种适配体功能材料及其制备方法和在OTA检测的应用。本发明提供的所述适配体功能材料具体包括：链霉亲和素包被的磁珠以及与所述链霉亲和素包被的磁珠相结合的5’‑Biotin‑A_18‑22‑GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA‑3’；其中，所述链霉亲和素与生物素Biotin亲和性结合，A_18‑22为18‑22个A碱基。该适配体功能材料对OTA具有高度特异性识别吸附作用，而且吸附容量高、吸附稳定好，在OTA检测中具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于霉菌毒素检测技术领域，具体涉及一种适配体功能材料及其制备方法和在OTA检测的应用。

背景技术

核酸适配体(Aptamer)能与靶物质特异性亲和结合，当Aptamer与靶物质靠近时，能够通过弯曲盘旋折叠、链内碱基互补配对形成特殊的立体结构(发夹、茎环、假节、凸环、G-四分体等)，这些立体结构是Aptamer与靶物质亲和作用的结构基础，具有特异性识别功能；靶物质或靶物质的一部分恰好能进入到立体结构中，在立体结构中具有某些特异性识别位点，能通过假碱基堆积、氢键作用及静电作用等作用力与靶物质亲和作用。近年来有关于Aptamer在目标物的色谱纯化中应用的报道。

赭曲霉毒素(Ochratoxin)在粮食谷物中分布面广、检出率高、产毒量大且毒性强而引起关注。针对赭曲霉毒素的检测方法中应用较广的是ELISA、HPLC及HPLC-MS法，但是由于食品基质复杂多样且霉菌毒素含量甚微，因此需要合适的前处理手段从样品中富集纯化霉菌毒素，如固相萃取技术。然而，传统的固相萃取材料受到了吸附选择性和吸附容量的限制，目前应用最多的免疫亲和柱价格昂贵、不易生产修饰且容易失活，因此新型的霉菌毒素吸附材料的研发成为了迫切需求。

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A，OTA)是赭曲霉毒素中毒性最高、对农产品污染最严重、食品中分布最广且产毒量最多的毒素，能引发生物体多种剧烈的毒性反应，如免疫毒性(引发淋巴腺体坏死，免疫抑制)、黏膜毒性(胃溃疡、肠道坏死)、生殖毒性、肝毒性和肾毒性(肝硬化、肾小管损伤等)以及致癌作用(国际癌症研究机构列入2B类致癌物清单中)。因此，对针对OTA的特异性选择吸附材料的研发更为迫切。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适配体功能材料及其制备方法和在OTA检测的应用，旨在解决现有OTA的特异性选择吸附材料有限的技术问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明一方面提供一种适配体功能材料，所述适配体功能材料包括：链霉亲和素包被的磁珠以及与所述链霉亲和素包被的磁珠相结合的5’-Biotin-A_18-22-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-3’；其中，所述链霉亲和素与生物素Biotin亲和性结合，A_18-22为18-22个A碱基。

本发明提供一种特异性选择吸附OTA的适配体功能材料，在该适配体功能材料中，以链霉亲和素磁珠为载体材料，用特异性吸附OTA的核酸适配体作为功能单体，且以A_18-22作为核酸适配体的5’端连接臂，通过链霉亲和素和生物素的生物学识别结合作用形成；这样的适配体功能材料具有很好的结构稳定性，同时通过试验证明，其仅对OTA具有高度特异性识别吸附作用，而且吸附容量高、吸附稳定好，在OTA检测和分析中具有很好的应用前景。

本发明另一方面提供一种适配体功能材料的制备方法，包括如下步骤：

提供链霉亲和素包被的磁珠，将所述链霉亲和素包被的磁珠分散于缓冲液中，得到磁珠分散液；

将5’-Biotin-A_18-22-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGAC A-3’加入到所述磁珠分散液中，进行孵育处理，得到适配体功能材料。