[发明专利]一种对JEV易感的猪扁桃体细胞系

说明书

本发明公开了一种对JEV易感的猪扁桃体细胞系，该细胞系通过慢病毒颗粒感染原代猪扁桃体细胞系，并在添加嘌呤霉素的含血清的DMEM/F12培养液中进行细胞筛选，再将阳性细胞用不含嘌呤霉素的培养液扩大培养获得的；该慢病毒颗粒是通过以pHY‑sv40‑Puro作为慢病毒载体，以psPAX2和pCMV‑VSV‑G作为辅助包装载体，共同转染进入293T细胞中获得的。本发明的细胞系具有无限传代的功能，对JEV敏感，可以用于相关研究。

技术领域

本发明涉及一种猪扁桃体细胞系，具体涉及一种对JEV易感的猪扁桃体细胞系。

背景技术

猪日本乙型脑炎(简称为乙脑)是由猪流行性乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitis virus，JEV)引起的常见病毒性脑炎，是一种人兽共患传染病，多种家畜、禽类以及人类都能够感染该病。该病主要经由蚊虫等吸血昆虫的叮咬以传播病毒，任何品种和性别的猪对该病均具有易感性。临床症状主要为妊娠母猪发生流产或是产死胎，初生仔猪脑炎、共济失调、发热、死亡，公猪睾丸明显肿大，个别病猪可能出现神经症状，有些孕畜也会被感染流产。

PK-15细胞(猪肾上皮细胞)、ST细胞(猪睾丸细胞)、PIEC细胞(猪髋动脉内皮细胞)等均是研究猪乙脑病毒感染常用的细胞系，但这些细胞的来源器官本身不感染或很少感染猪乙脑病毒，使用PK-15、ST、PIEC等细胞来研究猪乙脑病毒感染过程存在感染增殖不同于靶器官、先天性免疫应答不同于靶器官、获得性免疫应答不同于靶器官、病毒和细胞相互作用不同于靶器官等情况。这些病毒和基因的变化以及相互作用与靶器官的实际情况并不完全一致，甚至是完全不一样的，这种结果很可能会造成误导，导致实验结果和临床实际情况不一样，会影响临床的疫苗和药物开发。

猪扁桃体是猪多种疾病的靶器官，也是发生体内感染的病灶。但是目前没有可用的猪扁桃体细胞系用于研究猪扁桃体对猪病感染和传播的作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种对JEV易感的猪扁桃体细胞系，该方法解决了目前没有对猪病毒感染的猪扁桃体细胞系的问题，其具有无限传代的功能，且能维持猪扁桃体细胞的特性，在传代过程中能够保持核型正常，不存在染色体结构和数目的变化，且对JEV敏感，可以用于JEV的传代以及相关的研究。

为了达到上述目的，本发明提供了一种对JEV易感的猪扁桃体细胞系，该细胞系是通过慢病毒颗粒感染原代猪扁桃体细胞系，并在添加嘌呤霉素的含血清的DMEM/F12培养液中进行细胞筛选，再将阳性细胞用不含嘌呤霉素的培养基扩大培养获得的。

其中，所述慢病毒颗粒是通过以pHY-sv40-Puro作为慢病毒载体，以psPAX2和pCMV-VSV-G作为辅助包装载体，共同转染进入293T细胞中获得的。

优选地，所述原代猪扁桃体细胞系是在5％FBS的DMEM/F12培养基中进行培养过的，且在培养基中添加100U/mL的青霉素和100μg/mL的链霉素。

优选地，所述慢病毒颗粒采用2％FBS的DMEM培养。

优选地，所述扩大培养的培养基为不含嘌呤霉素的5％FBS的DMEM/F12培养基。

优选地，所述感染时加入5μg/mL的凝聚胺。

本发明的对JEV易感的猪扁桃体细胞系，解决了目前没有对猪病毒感染的猪扁桃体细胞系的问题，具有以下优点：

本发明的细胞系首次以猪扁桃体细胞作为宿主细胞，转染带有SV40抗原基因的慢病毒表达质粒，经Puromycin筛选获得对JEV易感的猪扁桃体细胞系。该细胞系具有无限传代的功能，且能维持猪扁桃体细胞的特性，在传代过程中能够保持核型正常，不存在染色体结构和数目的变化；而且，该猪扁桃体细胞系对JEV敏感，JEV可以在此细胞内复制，以用于JEV的传代以及相关的研究，为JEV的培养提供了一个新的细胞系，扩大了JEV研究的宿主细胞的范围，对于JEV对免疫系统的致病机理研究有重要的意义。