[发明专利]人体液中抗CASPR2自身抗体的检测材料、制备方法及应用

权利要求书

1.人体液中抗CASPR2自身抗体的检测材料，其特征在于，包括样品封闭材料和样品检测材料；

所述的样品检测材料通过以下制备方法制备获得：

步骤1，获取CASPR2的CDS序列作为目的基因，将带有酶切位点的目的基因插入17T2A质粒载体中，得到重组质粒载体17T2A-CASPR2；

其中，17T2A质粒载体包括含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列、原核复制子pUC Ori序列、病毒复制子SV4 0O ri序列、RSV启动子、慢病毒5’LTR、慢病毒3’LTR、Gag顺式元件、RRE顺式元件、env顺式元件、cPPT顺式元件、eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件、CMV启动子、MCS多克隆位点以及T2A元件；

步骤1具体包括以下步骤：

步骤1.1：通过人工合成或者PCR方法获得CASPR2的CDS序列作为目的基因，在目的基因两端加设SalI/NotI的酶切位点；

步骤1.2：将带有酶切位点的目的基因插入17T2A质粒载体中，插入位点为SalI/NotI，得到重组质粒，将该重组质粒命名为17T2A-CASPR2；

步骤1.3：对重组质粒17T2A-CASPR2进行测序，将测序正确的带有目的基因的菌种扩大培养后进行质粒提取，得到重组质粒载体17T2A-CASPR2；

步骤2，将重组质粒载体17T2A-CASPR2转染入293T细胞中，得到17T2A-CASPR2-293T细胞；

步骤3，将谷胱甘肽作为小分子有机配体，使用亲和层析法提取17T2A-CASPR2-293T细胞中的CASPR2抗原；

步骤4，将步骤3提取得到的CASPR2抗原固化在载体膜上，得到样品检测材料；

所述的样品封闭材料包括经过处理的载体膜和固化在处理后载体膜上的17T2A-293T细胞蛋白；所述的载体膜的处理过程为：将载体膜加入蔗糖与葡萄糖按照体积摩尔浓度比为1:1比例混合的混合试剂中，在100℃烘干20-30min或者37℃烘干8～16h；

所述的样品封闭材料的使用过程为：将待检测样品和样品封闭材料混合后孵育，孵育后加入到样品检测材料中再次孵育，洗涤，加入AP标记羊抗人IgG二抗孵育后进行底物显色。

2.如权利要求1所述的人体液中抗CASPR2自身抗体的检测材料，其特征在于，所述的步骤2中使用PEI转染方法、lipofectamin2000、lipofectamin3000、lipA或电转法将17T2A-CASPR2转染入293T细胞中，其中，电转条件为1500V～2000V、25μF、200Ω。

3.如权利要求1所述的人体液中抗CASPR2自身抗体的检测材料，其特征在于，所述的载体膜为硝酸纤维素膜、PVDF膜、尼龙膜、具有蛋白吸附能力的玻片、塑料材质的细胞培养皿或培养板。