[发明专利]人体液中抗CASPR2自身抗体的检测材料、制备方法及应用

说明书

本发明公开了人体液中抗CASPR2自身抗体的检测材料、制备方法及应用，本发明将CASPR2抗原包被于NC膜上制成抗CASPR2受体检测材料，人血清和脑脊液中的特异性CASPR2抗体会与抗原结合，利用碱性磷酸酶底物‑配体反应进行显色，并在显色反应中加入本发明的封闭材料，可用通过肉眼观察直接判断检测样品中是否含有CASPR2抗体。该方法具有灵敏度高，操作简便，快速检测等优点，有助于抗CASPR2受体脑炎的识别和诊断。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种人体液中抗CASPR2自身抗体的检测材料、制备方法及应用。

背景技术

接触蛋白相关蛋白2(Contactin Associated Protein Like 2，CASPR2)属于轴突蛋白家族，该蛋白在神经系统发育过程中介导神经元和神经胶质之间的相互作用，并且还参与分化轴突内钾离子电压门通道(Voltage-gated potassium channel，VGKC)的定位。该蛋白涉及多种神经发育障碍，包括Morvan综合征，精神分裂症，癫痫，自闭症，智力残疾和自身免疫脑炎。2010年Irani和Lai等人发现，以往被称为VGKC脑炎的疾病，其实际上的致病性抗体是针对CASPR2，而并非VGKC本身，并将CASPR2抗体自身阳性脑炎命名为抗CASPR2自身免疫边缘性脑炎(以下简称为抗CASPR2脑炎)。

我国首例抗CASPR2脑炎于2012年由解放军总医院报道，目前国内关于此类疾病的研究文献不过寥寥20余篇，可参考病例少，而常用的神经科影像学检测技术如CT、MRI等又难以帮助医生对此类疾病进行确诊。抗CASPR2脑炎患者最大特点是体内会产生抗CASPR2抗原的相关抗体，利用免疫学技术可检测到该类抗体。Bastien Joubert等人在18位病人的脑脊液样品中检测到了抗CASPR2的IgG抗体，2016年Helena等人在34位病人的血清和脑脊液中都检测到了抗CASPR2的抗体，检出率为100％，可见抗CASPR2抗体检测技术对于该类疾病的诊断和预后有重要意义。

因此，目前针对CASPR2自身抗体常利用免疫荧光技术，虽然检测率高，但是免疫荧光对细胞培养要求很高，检测结果易受细胞状态影响，制片过程繁琐，且制备好的片子不易保存，很难一次性对大批量样本同时检测或针对某一个样本进行反复检测。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种对CASPR2自身抗体进行检测的检测材料、该材料的制备方法及应用，解决现有的检测方法检测耗时长、步骤繁琐、抗体需求量大、成本高、灵敏度低等问题。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案予以实现：

人体液中抗CASPR2自身抗体的检测材料的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，获取CASPR2的CDS序列作为目的基因，将带有酶切位点的目的基因插入17T2A质粒载体中，得到重组质粒载体17T2A-CASPR2；

其中，17T2A质粒载体包括含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列、原核复制子pUC Ori序列、病毒复制子SV4 0O ri序列、RSV启动子、慢病毒5’LTR、慢病毒3’LTR、Gag顺式元件、RRE顺式元件、env顺式元件、cPPT顺式元件、eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件、CMV启动子、MCS多克隆位点以及T2A元件；

步骤2，将重组质粒载体17T2A-CASPR2转染入293T细胞中，得到17T2A-CASPR2-293T细胞；

步骤3，将谷胱甘肽作为小分子有机配体，使用亲和层析法提取17T2A-CASPR2-293T细胞中的CASPR2抗原；

步骤4，将步骤3提取得到的CASPR2抗原固化在载体膜上，得到人体液中抗CASPR2自身抗体的检测材料。

优选的，所述的步骤1具体包括以下步骤：