[发明专利]人体液中抗GABABR自身抗体的检测材料、制备方法及应用

说明书

本发明公开了人体液中抗GABABR自身抗体的检测材料、制备方法及应用，本发明将GABABR抗原包被于NC膜上制成抗GABABR受体检测材料，人血清和脑脊液中的特异性GABABR抗体会与抗原结合，利用碱性磷酸酶底物‑配体反应进行显色，并在显色反应中加入本发明的封闭材料，可用通过肉眼观察直接判断检测样品中是否含有GABABR抗体。该方法具有灵敏度高，操作简便，快速检测等优点，有助于抗GABABR受体脑炎的识别和诊断。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种人体液中抗GABABR自身抗体的检测材料、制备方法及应用。

背景技术

抗γ-氨基丁酸B型受体(gamma-aminobutyric acid receptor，GABABR)脑炎，属于神经免疫性脑炎，多数以癫痫为首发症状和记忆紊乱、精神症等边缘性脑炎症状，约50％的患者体内产生副肿瘤赘生物，多与小细胞肺癌有关，且预后不良。抗GABABR脑炎最早于2010年由Lancaster等报道，该研究利用免疫沉淀和免疫印迹的方法，于410位疑似副肿瘤相关脑炎或自免脑炎患者血液或脑脊液中检出15例患者含抗GABABR抗体。Romana等人利用免疫印迹和免疫荧光的方法，于9422例疑似自免脑炎患者和其他相关症状患者血液或脑脊液中检出20例含GABABR抗体，且从患者表现出症状到诊断花费时长大约4周左右。继抗GABABR自身抗体发现后，在病因学方面可与病毒性脑炎区分开。抗GABABR抗体的检测在脑脊液中的检出率高于血清，且免疫抑制疗法为有效的治疗方法。故早期抗-GABABR IgG的识别对这类疾病的诊断和这类患者的治疗、预后有很大价值。

目前常用的检测手段有免疫荧光、ELISA、免疫印迹、免疫组化等方法，这些方法普遍存在检测过程耗时较长，步骤繁琐，抗体需求量大，成本高，灵敏度不高等缺点，利用这些方法很难一次性对大批量样本同时检测或针对某一个样本进行反复检测。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种对GABABR自身抗体进行检测的检测材料、该材料的制备方法及应用，解决现有的检测方法检测耗时长、步骤繁琐、抗体需求量大、成本高、灵敏度低等问题。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案予以实现：

人体液中抗GABABR自身抗体的检测材料的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，获取GABABR的CDS序列作为目的基因，将带有酶切位点的目的基因插入17T2A质粒载体中，得到重组质粒载体17T2A-GABABR；

其中，17T2A质粒载体包括含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列、原核复制子pUC Ori序列、病毒复制子SV4 0O ri序列、RSV启动子、慢病毒5’LTR、慢病毒3’LTR、Gag顺式元件、RRE顺式元件、env顺式元件、cPPT顺式元件、eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件、CMV启动子、MCS多克隆位点以及T2A元件；

步骤2，将重组质粒载体17T2A-GABABR转染入293T细胞中，得到17T2A-GABABR-293T细胞；

步骤3，裂解17T2A-GABABR-293T细胞，去除17T2A-GABABR-293T细胞的核蛋白、DNA和胞浆蛋白，再加入复合提取液，4℃静置15～30min后在35～40℃水浴，直至出现分层；

其中，复合提取液为Triton X100、CHAPS、N-甲基葡糖胺按照体积比为1:1:1的比例混合或洋地黄皂苷、Triton X100、NP40、CHAPS按照体积比1:1～2：1～2：1的比例混合；

步骤4：取分层后的沉淀，向沉淀中加入混合液混匀后离心，取上清液，在上清液中加入重悬液和BSA混匀，将所得上清液固化在载体膜上，得到人体液中抗GABABR自身抗体的检测材料；