[发明专利]一种用于检测miRNA的水凝胶的制备方法及应用

权利要求书

1.一种用于检测miRNA的水凝胶的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：

1)透光掩模版的图案设计：掩膜板直径为30mm、厚度为1mm；

2)停止流动光刻平台的搭建；

3)水凝胶检测；

4)制备连接有miRNA适配体的水凝胶微粒。

2.根据权利要求1所述的用于检测miRNA的水凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤1)透光掩模版的图案设计，具体步骤如下：使用L-Edit软件，选定直径为30mm的区域作为工作区域，在此工作区域的中心位置选取长为5-7mm、宽为3-5mm的区域做另一图层，然后用工作区域减去此图层便得到中心区域为长方形的掩膜板，另外利用此种方法继续合成长方形、正方形、圆形或三角形。

3.根据权利要求1所述的用于检测miRNA的水凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤2)停止流动光刻平台的搭建，具体步骤如下：

(1)将上述掩膜板置于显微镜的光路中，调整好角度与聚焦位置；

(2)将PDMS芯片分别载气通道的两端打孔，一端为进样孔，一段为出样孔；

(3)将紫外光源连入显微镜的光路中调整焦距使光源聚焦到通道中，调整目镜放大倍数为10×，物镜放大倍数为40×。

4.根据权利要求1所述的用于检测miRNA的水凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤4)制备连接有miRNA适配体的水凝胶微粒，具体步骤如下：

(1)制备预聚物溶液：将3.5毫升PEG-DA 700液体，2毫升PEG200液体，0.5ml光引发剂Darocur 1173液体与4毫升的3×TE缓冲液混匀，做为预聚物溶液待用；

(2)将预聚物注入进样口处的注射器中，将注射器装入注射泵，设定注射速度为500-1000μm/min；

(3)开启注射泵，使预聚物充满通道，停止注射泵工作，打开紫外光源曝光50-100ms，形成颗粒后重新开启注射泵将颗粒冲出，重复以上步骤直至获得足够数量的水凝胶颗粒；

(4)将收集到的颗粒用1×TET缓冲液清洗数次，最后重悬于300-1000μl的1×TET缓冲液中，4℃保存待用。

5.根据权利要求4所述的用于检测miRNA的水凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤4)(3)中利用紫外光固化合成miRNA适配体(以miRNA21为例)的水凝胶微粒的长宽比为(50-100)μm×(30-50)μm。

6.一种基于水凝胶的miRNA检测技术，其特征在于：是基于权利要求1所述水凝胶颗粒的miRNA检测，通过改变掩膜板的形状控制透光的形状可以实现不同形状的水凝胶，实现不同的编码模式，结合图像处理以识别不同的形状达到混检多检的目的。

7.根据权利要求6所述的基于水凝胶的miRNA检测技术，其特征在于：具体应用方法是：

(1)取50微升的水凝胶颗粒加入50微升的TET；

(2)取5微升(10-1000amol)的待检miRNA于95微升的TE Buffer中；

(3)将上述两溶液混起来于金属浴中90分钟；

(4)将反应液于TET中清洗三次；

(5)900r/min离心3分钟后加入取下部液体100微升，加入245μl的杂交缓冲液，所述杂交缓冲液含900TET、0.031克NaCl、100微升NEB Buffer、2微升ATP、0.33微升通用连接子、1.88微升T4DNA连接酶；

(6)金属浴中30分钟；

(7)加入5μl稀释100倍的SAPE。