[发明专利]Illumina二代测序平台文库构建引入分子标签的方法、接头序列及应用

权利要求书

1.一种适用于Illumina二代测序平台的文库构建的接头序列，其特征在于，所述接头序列包括：5’-P-E-F-Q-3’，其中，P为测序平台配对序列、E为随机碱基序列、F为给定碱基序列、Q为Tn5转座酶末端识别序列。

2.根据权利要求1所述的接头序列，其特征在于，所述E为5-10个碱基组成的随机碱基序列，所述F为3-5个碱基组成的给定碱基序列。

3.根据权利要求1所述的接头序列，其特征在于，P选自：

1)AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC，或

2)CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT。

4.根据权利要求1所述的接头序列，其特征在于，Q选自：

1)TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG，或

2)GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的接头序列，其特征在于，所述5’-P-E-F-Q-3’选自SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.128中的任意一种或更多种。

6.一种适用于Illumina二代测序平台的文库构建的接头序列的设计方法，其特征在于，包括：设计如下两个不同接头序列：

接头序列1：5’-P1-E1-F1-Q1-3’

接头序列2：5’-P2-E2-F2-Q2-3’

其中，P1、P2为如权利要求1所述的测序平台配对序列、E1、E2为如权利要求1所述的随机碱基序列、F1、F2为如权利要求1所述的既定碱基序列、Q1、Q2为如权利要求1所述的Tn5转座酶末端识别序列。

7.根据权利要求6所述的设计方法，其特征在于，在一种优选实施例中，所述5’-P1-E1-F1-Q1-3’选自SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.64中的任意一种或更多种；所述5’-P2-E2-F2-Q2-3’选自SEQ ID NO.65-SEQ ID NO.128中的任意一种或更多种。

8.一种适用于Illumina二代测序平台的文库构建中引入分子标签方法，其特征在于，包括：

采用权利要求6所述接头序列1、所述接头序列2组装Tn5转座酶复合体；

使用组装后的Tn5转座酶复合体对DNA样本进行打断；打断的DNA分子两边分别标记E1-F1、E2-F2；

对打断后的DNA片段进行PCR扩增，纯化扩增产物。

9.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述适用于Illumina二代测序平台的文库构建的接头序列5’-P-E-F-Q-3’。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括序列：

5’-Phos-CTGTCTCTTATACACATCT-3’，和/或：

5’-AATGATACGGCGACCACCGA-3’、5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGA-3’。