[发明专利]从万年蒿中提取分离倍半萜内酯类化合物的方法

权利要求书

1.从万年蒿中提取分离倍半萜内酯类化合物的方法，其特征在于，所述倍半萜内酯类化合物为：1α-乙酰基桉叶-4-烯6β，11β氢-12,6内酯；(11S)-3-氧络桉烷-1,4-(15)-二烯烃-12,6α内酯；1-表去氢异黄酮；11-表阿霉素；菊花素；1α-乙酰基加利卡多醇；氰菊酯；1α，4α-二羟基桉叶-2-烯-5α，6β，11β氢-12,6-内酯；牛蒿素；(+)-去氢催吐萝芙木醇；

按上述化合物的排列顺序各化合物的结构式如下；

提取分离方法包括以下步骤：

步骤S1、取干燥万年蒿地上部分，粉碎后依次用6-8倍量的95％乙醇回流提取2-4次，每次1-2h，合并提取液，提取液减压浓缩得浸膏；

步骤S2、取浸膏加适量水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，回收溶剂后分别得到石油醚部分和乙酸乙酯部分；

步骤S3、取乙酸乙酯部分进行硅胶柱色谱分离，用石油醚-乙酸乙酯1:0和石油醚-乙酸乙酯4:1梯度洗脱，每个梯度所用洗脱溶剂为20L，收集洗脱液，每10L洗脱液为1个部分，分别减压浓缩，得到4个部分，即Fr.1～Fr.4；其中，所述硅胶柱内径为10cm；

步骤S4、将步骤S3获得的Fr.3经硅胶柱色谱分离，用石油醚-丙酮5:1和石油醚-丙酮1:1梯度洗脱，每个梯度所用洗脱溶剂为20L，收集洗脱液，每10L洗脱液为1个部分，分别减压浓缩，得4个亚组分，即Fr.3-1～Fr.3-4；其中，所述硅胶柱内径为10cm；

步骤S5、将步骤S4获得的Fr.3-1用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得1α-乙酰基桉叶-4-烯6β，11β氢-12,6内酯和(11S)-3-氧络桉烷-1,4-(15)-二烯烃-12,6α内酯，色谱条件为：Eclipse XDB-C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相40％MeOH/H₂O，流速3ml/min；

步骤S6、将步骤S4获得的Fr.3-2用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得1-表去氢异黄酮和11-表阿霉素；色谱条件为：Eclipse XDB-C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相40％MeOH/H₂O，流速3ml/min；

步骤S7、将步骤S4获得的Fr.3-3用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得菊花素、1α-乙酰基加利卡多醇和氰菊酯粗品，色谱条件为：Eclipse XDB-C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相40％MeOH/H₂O，流速3ml/min；之后分别取菊花素、1α-乙酰基加利卡多醇和氰菊酯粗品用适量甲醇溶解后进行二次HPLC制备，进一步分离纯化得菊花素、1α-乙酰基加利卡多醇和氰菊酯，色谱条件为：Eclipse XDB-C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相30％ACN/H₂O，流速3ml/min；

步骤S8、将步骤S4获得的Fr.3-4用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得1α，4α-二羟基桉叶-2-烯-5α，6β，11β氢-12,6-内酯和牛蒿素，色谱条件为：Eclipse XDB-C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相40％MeOH/H₂O，流速3ml/min；

步骤S9、将步骤S3获得的Fr.4用适量甲醇溶解后经ODS柱色谱分离，甲醇：水＝5:5洗脱，所用洗脱溶剂为10L，收集洗脱液，减压浓缩得1个亚组分，即Fr.4-1；

步骤S10、将步骤S9获得的Fr.4-1用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得(+)-去氢催吐萝芙木醇，色谱条件为：Eclipse XDB-C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相40％MeOH/H₂O，流速3ml/min。