[发明专利]一种制备油松针叶原生质体的方法

权利要求书

1.用于制备油松针叶原生质体的成套试剂，其特征在于：含有A和B；

所述A为酶解液，所述B为W5′溶液；

其中，所述酶解液包括纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶、甘露醇、KCl、MES、RbCl、牛血清蛋白和溶剂；所述纤维素酶在酶解液中的含量为25g/L，所述纤维素酶由纤维素酶R10和纤维素酶RS组成，所述纤维素酶R10和纤维素酶RS的含量比为3:2；所述果胶酶在酶解液中的含量为4g/L，所述果胶酶为果胶酶Y23；所述半纤维素酶在酶解液中的含量为10g/L；所述甘露醇在酶解液的含量为0.55~0.65mol/L；所述KCl在酶解液中的含量为0.02 mol/L；所述MES在酶解液中的含量为0. 2mol/L；所述RbCl在酶解液中的含量为0.01 mol/L；所述牛血清蛋白在酶解液中的含量为1g/L；

所述W5′溶液由RbCl、NaCl、KCl、MES和溶剂组成；所述RbCl在所述W5′溶液的含量为0.125mol/L，所述NaCl在所述W5′溶液的含量为0.154 mol/L，所述KCl在所述W5′溶液的含量为0.005 mol/L，所述MES在所述W5′溶液的含量为0.02mol/L。

2.权利要求1所述的成套试剂在制备油松针叶原生质体中的应用。

3.一种油松针叶原生质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将油松针叶在权利要求1中所述的酶解液中进行酶解得到酶解后的针叶；

2）将酶解后的针叶转入权利要求1中所述的W5′溶液进行处理，得到油松针叶原生质体。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述每g的油松针叶至少加入40mL的酶解液。