[发明专利]水产品中孔雀石绿的残留检测方法

权利要求书

1.水产品中孔雀石绿的残留检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：溶液的配制：配制混合内标标准溶液和样品溶液；

S2：制备混合粉末：将壳聚糖溶解于6-8mL质量分数为1%的醋酸溶液中制成壳聚糖溶液，然后加入硅藻土和活性炭，滴加质量分数为5%的NaOH溶液，调节至PH为9，溶液开始凝结后，再滴加质量分数为5%的HCl使混合溶液呈中性，于100-110℃下干燥1-2h，取出后研碎成粉末制得混合粉末；其中，壳聚糖、硅藻土、活性炭的重量份数比为1：1.2-1.7：7-8.5；

S3:SPE柱装柱：将混合粉末与碳纳米管混合制得填料，并将填料装入SPE柱中；其中，碳纳米管与混合粉末的重量份数比为1：1.5-2.8；

S4：固相萃取：取2-4mL质量分数为20%的乙腈活化SPE柱，将S1中的样品溶液进行上样，然后用2-4mL的乙腈：乙酸铵为1：1的混合溶液进行洗脱，收集洗脱液并浓缩至近干，加入乙腈定容至1mL，加入1mL5mol/L乙酸铵，震荡后备用；

S5：高效液相色谱-质谱检测：对步骤S4中震荡后的样品溶液进行色谱-质谱分析；色谱条件为：

流动相A：质量分数为0.1%的甲酸溶液；

流动相B：乙腈；流速为0.25mL/min；进样量2μL。

2.根据权利要求1所述的水产品中孔雀石绿的残留检测方法，其特征在于：所述步骤S3中，碳纳米管与混合粉末的重量份数比为1：2.0-2.4。

3.根据权利要求1所述的水产品中孔雀石绿的残留检测方法，其特征在于：所述步骤S4中，收集洗脱液后采用氮吹的方式浓缩至近干，氮吹的温度为45℃。

4.根据权利要求1所述的水产品中孔雀石绿的残留检测方法，其特征在于：所述步骤S4中，洗脱液定容并震荡后，经0.2μm滤膜过滤后再进行测试。

5.根据权利要求1所述的水产品中孔雀石绿的残留检测方法，其特征在于：所述混合内标标准溶液的配制包括以下步骤：

（a）分别取孔雀石绿、隐色孔雀石绿、氘代孔雀石绿、氘代隐色孔雀石绿标准品，用乙腈分别配制为100μg/mL的标准储备液；

（b）分别吸取1mL孔雀石绿及隐色孔雀石绿的标准储备液，混合均匀后用乙腈稀释为2ng/mL、4ng/mL、8ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL的混合标准储备液；

（c）分别吸取1mL氘代孔雀石绿及氘代隐色孔雀石绿的标准储备液，混合均匀后用乙腈稀释为2ng/mL、4ng/mL、8ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL的混合内标标准储备液。

6.根据权利要求5所述的水产品中孔雀石绿的残留检测方法，其特征在于：所述样品溶液的配制方法包括以下步骤：称取4-6g已捣碎样品，加入200-205μL混合内标标准溶液，加入10-15mL乙腈，超声波震荡提取后再用匀浆提取，用乙腈洗涤匀浆刀头，合并上清液后用乙腈定容至25mL备用。

7.根据权利要求1所述的水产品中孔雀石绿的残留检测方法，其特征在于：所述高效液相色谱采取梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0-3.5min：流动相B保持15%；3.5-4.5min：流动相B保持50%；4.5-6min：流动相B保持95%；6-7min：流动相B保持15%。