[发明专利]一种玫烟色棒束孢毒素提取的方法及其应用

权利要求书

1.一种从玫烟色棒束孢SP535中提取玫烟色棒束孢毒素的方法，其包括如下步骤：

（1）在玫烟色棒束孢SP535的发酵液加0.8-1.2倍体积的有机溶剂乙酸乙酯，其中玫烟色棒束孢SP535的发酵液制备方法是将玫烟色棒束孢的孢子悬浮液，在恒温摇床内摇瓶发酵后对菌液行抽滤，得到菌丝和发酵液，对发酵液离心备用；

（2）超声波震荡30-50min以打破细胞壁加速毒素萃取；

（3）震荡后放入0-6 ℃冰箱静置，期间每隔7-9 h搅拌一次，用分液漏斗把萃取液进行分液，保留萃取后的有机相；

（4）将萃取后的有机相进行蒸发得到粗毒素；

其中，所述玫烟色棒束孢SP535的保藏编号为GDMCC NO: 60514。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在第(1)步，第(3)步或/和第(4)步测定其蛋白浓度，监测毒素产生和提取效果。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在第(1)步中添加的有机溶剂乙酸乙酯的量为玫烟色棒束孢SP535的发酵液的同等体积。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中第（4）步中的蒸发是旋转蒸发。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第(3)步是放入4℃冰箱中静置，时长20-28h。

6.一种由如权利要求1至4任一项所述的方法获得的玫烟色棒束孢粗毒素。

7.如权利要求6所述的粗毒素在防治烟粉虱中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，是将粗毒素液体剂型喷施在作物上。

9.一种检测玫烟色棒束孢粗毒素的方法，其中是如权利要求1至5任一项所述的方法获得的玫烟色棒束孢粗毒素用乙酸乙酯溶解，放在通风橱中待有机溶剂蒸发后用色谱纯异丙醇溶解后进行测试，测试条件如下：流动相A：0.1%甲酸的乙腈，B含0.1%甲酸＋10 mM甲酸铵水溶液，流速：100 μl/min，进样量：5μl，检测波长：215 nm。