[发明专利]一种玫烟色棒束孢毒素提取的方法及其应用

说明书

本发明公开一种玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)菌株SP535毒素提取方法，其包括如下步骤：（1）在玫烟色棒束孢SP535的发酵液加0.8‑1.2倍体积的有机溶剂乙酸乙酯;（2）超声波震荡以打破细胞壁加速毒素萃取，优选超声振荡30‑50min；（3）震荡后放入0‑6℃冰箱静置，用分液漏斗把萃取液进行分液，保留萃取后的有机相；（4）将萃取后的有机相进行旋转蒸发得到粗毒素。本发明通过合理的实验方案，提供一种有效的玫烟色棒束孢毒素提取的方法，所得到的粗毒素对烟粉虱的致病力强，可进一步研制成防治烟粉虱中的生物农药，或与其他药物配合使用。

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体涉及生物防治领域，尤其涉及一种玫烟色棒束孢毒素提取及鉴定的方法。

背景技术

由于化学农药的长期使用，一些害虫产生很强的抗药性，还有许多害虫的天敌在防治过程中被误杀(孟素艳.虫害化学防治过程中保护害虫天敌的措施[J].河北农业,2012,(03):35-37)。随着现代绿色食品生产的迅猛发展，传统的病虫害防治模式需要改变，亟待寻求可持续的绿色治理途径(梁宗琦.昆虫病原真菌的综合开发研究[A].中国植物学会真菌学会.《中国虫生真菌研究与应用》(第一卷)[C].中国植物学会真菌学会:1986:10)。目前生物防治在我国的病虫害防治中所占的比例仅为5％，与生产实际的需求差距较大，加上市场上无公害蔬菜、果品以及绿色食品倍受青睐，这意味着生物防治具有广阔的应用前景(何琳,喻红,邹晖,等.抗药性基因突变筛选高产菌株[J].江西化工,2004,(04):169-171)。尤其是，烟粉虱在世界各地广泛传播并暴发成灾，其为多食性害虫，生物型众多，寄主广泛，危害极大。烟粉虱通过吸食寄主植物汁液产生直接危害，还会通过分泌蜜露诱发煤污病、传播病毒病造成间接危害，给许多国家的农业生产造成了巨大损失。烟粉虱所传播的病毒种类超过150种，其中由双生病毒引起的番茄黄化曲叶病是一种毁灭性病害，严重时可导致番茄100％损失，并已蔓延至其它作物。由于化学杀虫剂的滥用，烟粉虱已对多种杀虫剂产生了抗性。玫烟色棒束孢对自然界中烟粉虱种群的消长起着重要的自然控制作用，是粉虱的一类重要病原微生物。

虫生真菌的资源丰富，已经记载种类有800多种(杨运华,杜开书,石明旺.虫生真菌的生物防治研究进展[J].河南科技学院学报(自然科学版),2011,39(01):34-37)，主要分属于子囊菌及结合菌门，其中子囊菌类的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、绿僵菌(Metarhizium)等被开发成为重要的害虫生防制剂。病原真菌防治昆虫具有毒性低、无污染、可持续性强、有害生物不易产生抗性等优点，可有效避免化学农药带来的农药残留超标、害虫抗药性增加等一系列问题。杀虫真菌农药的研制可以使化学防治与生物防治充分协调的结合使用，使害虫防治工作更加合理、有效。我国自50年代后期开始研究用虫生真菌治虫，主要是应用球孢白僵菌防治大豆食心虫等害虫(万方浩,叶正楚,郭建英,等.我国生物防治研究的进展及展望[J].昆虫知识,2000,(02):65-74)。因此，开发研究高效、质量稳定的杀虫真菌农药已成为害虫防治的关键问题。