[发明专利]芋螺抗皱素的制备方法

权利要求书

1.芋螺抗皱素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将固相载体依次与Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、H-Pyr-OH或其盐在碱或者缩合剂存在下进行缩合，得到全保护肽树脂；

步骤2：全保护肽树脂经裂解试剂裂解后，得到芋螺抗皱素线性肽；

步骤3：将芋螺抗皱素线性肽用DMSO水溶液溶解澄清后，加入到缓冲盐体系中，最终线性肽反应浓度控制在较稀浓度；室温下环化24～48小时，得到芋螺抗皱素粗肽环化液；

步骤4：粗肽环化液经纯化、浓缩、冷冻干燥，得到芋螺抗皱素；

步骤1所述的固相载体选自RinkAmideAMResin和RinkAmideMBHAResin；

RinkAmideAMResin和RinkAmideMBHAResin的替代度均为0.4mmol/g～1.5mmol/g；

步骤1中所述的缩合剂选自HOBt、HBTU、DIC；

步骤1中所用的碱为DIEA、吡啶、碳酸氢钠、碳酸钠、吗啡林、氢氧化钠；

氨基酸的投料量比为2.0eq，氨基酸和缩合剂的比值为1：1.1；

步骤2所述裂解液采用体积百分比为80％～95％的TFA、体积百分比1-10％的乙二硫醇、体积百分比1-10％的苯甲硫醚、余量为纯化水组成的混合酸液；

步骤3所述DMSO水溶液为采用体积百分比为10％的DMSO,90％的纯化水组成的混合溶液；

步骤3所述缓冲盐体系为磷酸盐缓冲盐体系，用DIEA调PH值到9.0；

步骤3所述较稀浓度为按照线性肽浓度1mg/mL；

步骤4粗肽环化液纯化的方法为：将粗肽环化液用0.45μm滤膜过滤；滤液经C18柱纯化，流动相：A为0.1％的三氟乙酸水溶液，B为乙腈；梯度：B相为28％-45％。