[发明专利]一种含有抗体的肿瘤治疗剂的开发和应用

说明书

本公开涉及一种识别B7‑H3蛋白的抗体、一种识别B7‑H3蛋白和CD3的双特异性抗体，及其制造方法和应用。

技术领域

本公开涉及一种识别B7-H3蛋白的抗体及其制造方法和应用。

背景技术

B7-H3也称为CD276，是一种I型跨膜蛋白，属于B7-CD28超家族。B7-H3胞外区包含两个串联的IgV-IgC结构域(4Ig-B7-H3，即IgV-IgC-IgV-IgC)(Collins M，2005)，与鼠源B7-H3(2Ig-B7-H3)显示具有类似的功能(Hofmeyer K，2008)。最初人们认为B7-H3作为一种共刺激分子，对CD4和CD8 T细胞的增殖具有协同刺激作用，在TCR信号的存在下，选择性地增强干扰素的产生(Chapoval，Al.2001；Zhang，GB.2004)。然而，近年来的多数研究结果表明，B7-H3是一种抑制性分子，如B7-H3可抑制由抗TCR或同种异体抗原呈递细胞的抗体介导的T细胞增殖(Sub WK，2003；Veenstra RG，2015)，这种抑制作用可能通过NFAT、NFkB和AP-1因子来控制(Hofmeyer KA，2007)。

人B7-H3蛋白具有膜结合型和可溶性两种，膜结合型B7-H3蛋白主要分布于肿瘤细胞表面，在细胞内部的细胞核、运输小体和外泌体等也有发现(Ingebrigtsen VA，2012；Flem-Karlsen K，2017)。可溶性B7-H3由蛋白酶从细胞膜上水解下来，肿瘤患者血清中可以检测到高水平的可溶性B7-H3，提示B7-H3可以作为生物标志物(Xie C，2016)。尽管B7-H3的mRNA转录片段可以在多种正常组织检测到(Collins M，2005)，但证据显示B7-H3蛋白水平的表达受到严格调控，在正常组织细胞表面缺失或极低(Yi KH，2009)。相反，B7-H3蛋白在肿瘤细胞表面表达上调，且与疾病严重程度正相关(Zang X，2007；Sun Y，2006；Tekle C，2012；Wang L，2013)。在非小细胞肺癌中，B7-H3蛋白的表达升高与患者预后呈现负相关(Lou Y，2016；Danilova L，2016)。有报道B7-H3在成神经细胞瘤、胃癌、卵巢癌、前列腺癌和培养的肿瘤干细胞上高表达(Modak S，2001；Zang X，2010)。B7-H3可能被肿瘤利用作为免疫逃避途径(Hofmeyer K，2008)，在人肝细胞癌中，B7-H3表达与T细胞增殖抑制和降低干扰素-γ表达有关(Sun TW，2012)，在小鼠胰腺癌模型中，B7-H3阻断导致CD8+T细胞浸润增加和明显的抗肿瘤作用(Yamato I，2009)。

B7-H3在肿瘤相关上皮细胞也有表达，通常高表达水平对应恶化程度高，有研究将B7-H3的表达水平作为乳腺癌诊断指标(Bachawal SV，2015)。最近有研究将B7-H3单克隆抗体标记212Pb，应用于卵巢癌治疗，临床前研究证明了B7-H3单克隆抗体可同时靶向肿瘤和肿瘤血管内皮细胞，显示出初步疗效和良好的安全性(Kasten BB，2017)。另外，偶联pyrrolobenzodiazepine的B7-H3抗体也同时作用于B7-H3阳性肿瘤细胞和肿瘤血管内皮系统(Seaman S，2017)。B7-H3在肿瘤血管内皮系统中的高表达可能有助于肿瘤转移前微环境的形成并促进转移，有报道可溶性B7-H3介导肿瘤细胞中血管内皮生长因子的表达(Xie C，2016)。

发明内容

本发明人以重组人B7-H3蛋白免疫小鼠，得到了多株识别人B7-H3重组蛋白的高亲和力抗体，分别结合于B7-H3的IgC结构域或IgV结构域。本发明抗体能够高特异性地结合B7-H3蛋白，其具有很高的亲和力，并且介导细胞杀伤作用，从而可以用于胃癌、胰腺癌等一些恶性肿瘤的诊断和治疗。本发明进一步将人源化的B7-H3抗体与人源化CD3抗体构建双特异抗体，该双特异抗体可有效杀伤表达B7-H3的肿瘤细胞。

在一方面，本公开提供了结合人B7-H3蛋白的抗体或其抗原结合部分。

在一方面，本公开提供了结合人CD3蛋白的抗体或其抗原结合部分。