[发明专利]间充质干细胞的分离方法

权利要求书

1.一种间充质干细胞的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：

取完整的人源胎盘组织，从所述胎盘组织的脐静脉灌入清洗灌注液直至流出胎盘组织的清洗灌注液呈无色；

将所述胎盘组织封闭处理以使所述胎盘组织内部形成不渗漏的灌注空间，从所述胎盘组织的脐静脉灌入酶灌注液进行消化；

收集并培养所述酶灌注液中包含间充质干细胞的第一目标细胞；

将所述第一目标细胞培养至对数生长期，保留1/3的所述第一目标细胞的游离细胞进行传代培养，以扩增所述间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述的间充质干细胞的分离方法，其特征在于，在灌入清洗灌注液之前，还包括：将所述胎盘组织充分洗净以除去表面的血污。

3.根据权利要求1所述的间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述清洗灌注液的灌注速度为100-150ml/min，所述清洗灌注液的体积为3-5L。

4.根据权利要求3所述的间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述清洗灌注液为D-Hank's、磷酸缓冲盐溶液和生理盐水中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述将所述胎盘组织封闭处理的步骤为：采用半透膜将所述胎盘组织包裹进行封闭。

6.根据权利要求1所述的间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述将所述胎盘组织封闭处理的步骤为：将所述胎盘组织中羊膜的出口封闭。

7.根据权利要求1所述的间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述酶灌注液的灌注速度为80-100ml/min，所述酶灌注液的灌注时间为1-2h，所述灌入酶灌注液的过程在恒温条件下进行。

8.根据权利要求1所述的间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述酶灌注液包含胶原酶和胰蛋白酶，所述胶原酶的用量为0.5-5.0mg/ml，所述胰蛋白酶的用量为0.5-5.0％。

9.根据权利要求1所述的间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述收集并培养所述酶灌注液中包含间充质干细胞的第一目标细胞的步骤包括：

接种时调整所述第一目标细胞的密度至8×10⁷～2×10⁸个/L，进行静置培养。

10.根据权利要求1所述的间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述从所述胎盘组织的脐静脉灌入酶灌注液进行消化的步骤之后，还包括：

将消化后的所述胎盘组织进行静置培养，得到包含间充质干细胞的第二目标细胞。

11.根据权利要求10所述的间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述将消化后的所述胎盘组织静置培养的步骤，包括：

从所述胎盘组织中分别取以下组织块进行静置培养：脐带、羊膜、绒毛膜平滑肌层、绒毛膜滋养层和蜕膜组织。

12.根据权利要求11所述的间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述静置培养的步骤包括：

将所述组织块进行预处理，并将预处理后的所述组织块放置于培养器皿底面进行平铺，沿培养器皿边缘加入培养基直至没过所述组织块。

13.根据权利要求12所述的间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述将消化后的所述胎盘组织静置培养的步骤，还包括：

当培养器皿中的细胞生长至对数生长期，用胰酶进行消化得到包含所述间充质干细胞的第二目标细胞。