[发明专利]间充质干细胞的分离方法

说明书

本申请提供了一种间充质干细胞的分离方法，包括如下步骤：取完整的人源胎盘组织，从所述胎盘组织的脐静脉灌入清洗灌注液直至流出胎盘组织的清洗灌注液呈无色；将所述胎盘组织封闭处理以使所述胎盘组织内部形成不渗漏的灌注空间，从所述胎盘组织的脐静脉灌入酶灌注液进行消化；收集并培养所述酶灌注液中包含间充质干细胞的第一目标细胞；将所述第一目标细胞培养至对数生长期，保留1/3的所述第一目标细胞的游离细胞进行传代培养，以扩增所述间充质干细胞。本申请能够大大提高间充质干细胞的分离产量。

技术领域

本申请涉及干细胞领域，具体而言，本申请涉及一种间充质干细胞的分离方法。

背景技术

间充质干细胞存在于多种组织，具有向成脂、成骨、成软骨、成脂肪、成神经，骨髓基质甚至肝脏细胞等多种分化潜能的干细胞，是细胞治疗、组织工程研究中一种重要的种子细胞和基因治疗载体。其临床转化应用已成为研究热点，其中如何大量获得原代间充质干细胞是各项研究的关键。

现有技术中，对于间充质干细胞的分离、培养及纯化有多种方法，然而现有的方法由于存在各种缺陷至今没有适合大规模培育临床适用间充质干细胞的方法。

发明内容

本申请的目的旨在提供一种产量较高的间充质干细胞的分离方法。

为了实现上述目的，本申请提供以下技术方案：

一种间充质干细胞的分离方法，包括如下步骤：

取完整的人源胎盘组织，从所述胎盘组织的脐静脉灌入清洗灌注液直至流出胎盘组织的清洗灌注液呈无色；

将所述胎盘组织封闭处理以使所述胎盘组织内部形成不渗漏的灌注空间，从所述胎盘组织的脐静脉灌入酶灌注液进行消化；

收集并培养所述酶灌注液中包含间充质干细胞的第一目标细胞；

将所述第一目标细胞培养至对数生长期，保留1/3的所述第一目标细胞的游离细胞进行传代培养，以扩增所述间充质干细胞。

优选地，在灌入清洗灌注液之前，还包括：将所述胎盘组织充分洗净以除去表面的血污。

优选地，所述清洗灌注液的灌注速度为100-150ml/min，所述清洗灌注液的体积为3-5L。

优选地，所述清洗灌注液为D-Hank's、磷酸缓冲盐溶液(PBS)和生理盐水中的至少一种。

优选地，所述将所述胎盘组织封闭处理的步骤为：采用半透膜将所述胎盘组织包裹进行封闭。

优选地，所述将所述胎盘组织封闭处理的步骤为：将所述胎盘组织中羊膜的出口封闭。

优选地，所述酶灌注液的灌注速度为80-100ml/min，所述酶灌注液的灌注时间为1-2h，所述灌入酶灌注液的过程在恒温条件下进行。

优选地，所述酶灌注液包含胶原酶和胰蛋白酶，所述胶原酶的用量为0.5-5.0mg/ml，所述胰蛋白酶的用量为0.5-5.0％。

优选地，所述收集并培养所述酶灌注液中包含间充质干细胞的第一目标细胞的步骤包括：

接种时调整所述第一目标细胞的密度至8×10⁷～2×10⁸个/L，进行静置培养。

优选地，所述从所述胎盘组织的脐静脉灌入酶灌注液进行消化的步骤之后，还包括：

将消化后的所述胎盘组织进行静置培养，得到包含间充质干细胞的第二目标细胞。

优选地，所述将消化后的所述胎盘组织静置培养的步骤，包括：

从所述胎盘组织中分别取以下组织块进行静置培养：脐带、羊膜、绒毛膜平滑肌层、绒毛膜滋养层和蜕膜组织。